[发明专利]一种重组红霉素工程菌及其构建方法和筛选方法和应用

权利要求书

1.一种重组红霉素工程菌，其特征在于，所述重组红霉素工程菌是在红霉素产生菌中同时过量表达sucA基因和sucB基因所得，所述sucA基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述sucB基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。

2.如权利要求1所述的重组红霉素工程菌，其特征在于，所述红霉素产生菌为红霉素高产菌HL3168-E3。

3.如权利要求1所述的重组红霉素工程菌在生产红霉素中的应用。

4.如权利要求1所述的重组红霉素工程菌的构建方法，包括步骤：

构建重组质粒pIB-sucB：以红霉素产生菌的基因组作为模板，以引物1和引物2进行PCR扩增，获得sucB基因的扩增片段；将所述sucB基因的扩增片段连接至含启动子ermE*p的质粒载体中，获得重组质粒pIB-sucB；

构建重组质粒pIB-sucBA：以红霉素高产菌的基因组作为模板，采用引物对引物3和引物4进行PCR扩增，获得sucA基因的扩增片段；将所述sucA基因的扩增片段连接至所述重组质粒pIB-sucB中，获得重组质粒pIB-sucBA；以及，

将所述重组质粒pIB-sucBA转入至红霉素高产菌中，获得所述重组红霉素工程菌；其中，

所述引物1的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示，所述引物2的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示，所述引物3的核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示，所述引物4的核苷酸序列如SEQ IDNO.6所示。

5.如权利要求4所述的构建方法，其特征在于，在所述构建重组质粒pIB-sucB的步骤中，以Gibson组装克隆法将所述sucB基因的扩增片段连接至含启动子ermE*p的质粒载体中。

6.根据权利要求4所述的构建方法，其特征在于，在所述构建重组质粒pIB-sucBA的步骤中，以Gibson组装克隆法将所述sucA基因的扩增片段连接至重组质粒pIB-sucB中。

7.如权利要求4至6中任一项所述的构建方法，其特征在于，所述红霉素产生菌为红霉素高产菌HL3168-E3。