[发明专利]一种硫酸软骨素的制备方法及应用

说明书

本发明提供了一种硫酸软骨素的制备方法，所述硫酸软骨素的制备方法包括以下步骤：预处理；第一次提取；第二次提取；第一次超滤浓缩；第一次醇沉；醇洗脱水。本发明还提供了一种上述硫酸软骨素在制备动脉粥样硬化疾病药物中的应用。本发明能够高效进行硫酸软骨素的制备工作，以酶解法为主，并辅以超声波振动手段，促进酶解过程的启动以及提高了酶解过程中的酶活，显著的提高硫酸软骨素的生产效率，且能够有效促进硫酸软骨素与聚集蛋白糖糖链上的相连接核心蛋白质的糖苷键断裂，并对酶解所产生的多肽链及杂质蛋白进行针对性的水解，能够有效降低产物中的蛋白质残留问题，显著提高所得成品硫酸软骨素的纯度。

技术领域：

本发明涉及医药制备技术领域，尤其涉及一种硫酸软骨素的制备方法及其应用。

背景技术：

硫酸软骨素(Chondroitin Sulfate，CS)是一种黏多糖，吸水性较强，多呈白色粉末状，易吸湿，易溶于水，不不溶于乙醇、氯仿、丙酮等有机溶剂，广泛分布于人和一些动物如猪、牛、羊、鱼等的身体组织中，尤其是动物的软骨组织，如喉骨、鼻中骨、气管等，能够广泛应用于神经性头痛、神经痛、关节痛、偏头痛、动脉硬化症等症状，也可用于链霉素引起的听觉障碍及肝炎等症状的辅助治疗。

现有技术中，多采用酶解法或碱提酶解法提取硫酸软骨素，经过乙醇沉淀得到硫酸软骨素粗品。随着硫酸软骨素市场的不断成熟，对硫酸软骨素质量的要求也在进一步提高，目前的技术中，通常采用氧化水解法、乙醇分级沉淀法、等电点法、树脂吸附法等方法对制得的粗品进行精化提纯，以满足市场的需求，但是采用上述分布生产的方式，较为繁琐，不利于形成工业化的大规模生产，生产周期较长，成本较高，且生产成品中以蛋白质为主的杂质较多，通常无法将成品中的蛋白质下降至5％以下。

因此，本领域亟需一种硫酸软骨素的制备方法及其应用。

有鉴于此，提出本发明。

发明内容：

本发明的目的在于提供一种能够更好使用硫酸软骨素的制备方法及应用，以解决现有技术中的至少一项技术问题。

具体的，本发明的第一方面，提供了一种硫酸软骨素的制备方法，所述硫酸软骨素的制备方法包括以下步骤：

预处理：将软骨原料加去离子水浸没并蒸煮，去除软骨表层附着的肌肉组织及油脂，蒸煮温度为50-60℃，蒸煮时长为12-18小时，并将蒸煮后的软骨原料使用粉碎机粉碎；

第一次提取：将预处理步骤后的软骨原料转移至超声波萃取器中，用去离子水浸没并加入按溶液体积计3％的氯化钠，使用氢氧化钠水溶液调节溶液pH为8-9，升温至40-60℃，加入按软骨重量计0.2-0.8％的复合酶，加入按溶液体积计0.1-0.2％有机缓冲液，维持溶液 pH8-9，保温40-60℃，在频率20000HZ的超声波条件下振动60-90分钟，收集提取液；

第二次提取：用去离子水浸没第一次提取步骤后的软骨原料，加入按溶液体积计3％的氯化钠，使用氢氧化钠水溶液调节溶液pH为8-9，升温至40-60℃，加入按软骨重量计0.1-0.4％的单酶，加入按溶液体积计0.1-0.2％有机缓冲液，维持溶液pH8-9，保温50-60℃，在频率 15000HZ的超声波条件下振动30-60分钟，收集提取液；

第一次超滤浓缩：将第一次提取及第二次提取步骤所得提取液混合，使用2000-3000分子量的超滤膜浓缩，得到浓缩液；

第一次醇沉：将第一次超滤浓缩步骤所得的浓缩液，使用氢氧化钠水溶液调节溶液pH 为6-7，加入按溶液体积计3％的氯化钠，再加入乙醇，使溶液乙醇浓度达到60-70％，收集沉淀物；

醇洗脱水：将第一次醇沉步骤所得的沉淀物，使用80％浓度的乙醇水溶液洗涤后，使用 95％浓度的乙醇水溶液脱水，干燥后得到成品硫酸软骨素；