[发明专利]一种可自动加液及调节预冻高度的精液冷冻稀释方法

说明书

本发明涉及一种可自动加液及调节预冻高度的精液冷冻稀释方法，包括如下步骤：将新鲜精液放入50ml的烧杯中，于自动加液稀释装置的恒温水浴摇床上预热，摇床转速设定为10‑220rpm；稀释液下滴的速度控制为10‑200微升/秒；液氮气相预冻时，预冻装置高度根据动物品种确定，最后投入液氮中保存。本发明可自动添加稀释液，标准化操作，排除个人手工操作干扰，并根据不同动物调整不同的液氮气相预冻高度。本发明的方法使用的装置结构简单，利用实验室现有器械进行简单改造即可使用，因此不会对冻精售价造成影响，但是显著提高了冻精品质，在生产试验中能提高产羔率8‑9个百分点，显著提高了畜牧养殖场的生产效益。

技术领域

本发明涉及动物繁殖育种领域，具体涉及一种可自动加液及调节预冻高度的精液冷冻稀释方法。

背景技术

现代畜牧业，养牛养猪大部分都是用冻精来做人工授精让母畜怀孕，场里很少养公牛，冻精要稀释后做成细管，一个母畜一只细管，这样一只公畜就能供很多母畜受孕，精液冷冻保存技术对于遗传资源保护和人工授精技术推广具有重要意义。冷冻精液的品质关系到母畜怀孕生产的效率和仔畜的强壮程度，是影响现代畜牧业生产效益的关键因素。通常，精液冷冻过程包括精液采集、质量评价、精液稀释、低温平衡、液氮气相预冻和液氮保存等环节，对于如何提高冷冻精液品质，目前国内外相关研究主要集中于稀释液配方上，最近还有文献报道提出，由于稀释效应的存在，冷冻精液中，稀释液与需要冷冻的新鲜精液的比例会对解冻后的精子质量产生一定影响。

然而实际操作中，每个环节都会对冻精品质产生影响，特别是精液稀释、液氮气相预冻这2个环节，是给精液冷冻带来负面效应的关键环节。稀释液的添加速度以及精液与稀释液混匀的速度对冻精品质有关键影响，但是长期以来，研究人员和日常生产人员对这一环节关注度不足，精液稀释基本都是人工手动，靠经验操作，稀释液添加速度和精液与稀释液混匀的速度无法实现标准化，不同的操作人员其稀释效果差异大，不统一、不标准，是造成不同批次冻精质量差异的重要原因之一。

另外，在液氮气相预冻操作时，目前的预冻装置为一个金属台座，将细管放在金属台座上再放入液氮气相中预冻，但是长期以来，研究人员和日常生产人员并未意识到液氮气相的温度随高度不同而不同，不同品种的动物，精液在预冻时需要的温度实际上并不相同，如果不管什么动物的精液预冻时都只用一个固定高度的金属台座，而不管冻精细管离液氮液面的高度，这样做并不科学，也没有完全挖掘提升冻精品质的潜力。

发明内容

为解决以上问题，本发明提出一种可自动加液及调节预冻高度的精液冷冻稀释方法，对稀释液添加方式和预冻方式提出标准化的解决方案。

本发明解决其技术问题所采用的技术方案为：

一种可自动加液及调节预冻高度的精液冷冻稀释方法，包括如下步骤：

1)采集新鲜精液进行品质检查，精子活力大于75％，精子密度大于2.5×10⁹/ml，畸形率小于10％的可以用于冷冻保存；

2)将步骤1)获得的符合冷冻保存条件的新鲜精液放入50ml的烧杯中，所述烧杯事先放置于自动加液稀释装置的恒温水浴摇床上预热，温度设置为36-40℃；

3)打开所述自动加液稀释装置的摇床，转速设定为10-220rpm；

4)将稀释液加入所述自动加液稀释装置的滴定管，打开滴定管下部的流量控制阀，将稀释液下滴的速度控制为10-200微升/秒；

5)稀释液滴尽后，关闭摇床，取下烧杯，将杯中已经稀释好的精液分装于0.25ml塑料细管中，封口；

6)将步骤5)获得的塑料细管和预冻装置一起置于5℃环境中平衡4小时，塑料细管与预冻装置不接触；