[发明专利]一种具有荧光特性的铁载体PVD、制备方法及其用途

权利要求书

1.一种具有荧光特性的铁载体PVD，其特征在于，其结构式如式(A)所示，

2.权利要求1所述具有荧光特性的铁载体PVD具有耐受变性剂SDS、蛋白酶K、还原剂DTT、氧化剂H₂O₂、以及Ca²⁺、Mg²⁺和Zn²⁺的用途。

3.权利要求1所述具有荧光特性的铁载体PVD具有加入Mn²⁺、Co²⁺、Ni²⁺、Cu²⁺、Fe²⁺后引起铁载体PVD荧光淬灭的用途。

4.一种权利要求1所述具有荧光特性的铁载体PVD的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

发酵种子液制备：在海水LB培养基中接种假单孢属细菌Pseudomonas sp.SXM-1进行恒温培养，所得培养物作为种子液；所述假单孢属细菌Pseudomonas sp.SXM-1的保藏编号为CCTCC No.M2019918；

接种培养：采用液体发酵方式，在琥珀酸钠发酵培养基中接种上述种子液，于恒温培养箱中培养得到发酵液；所述琥珀酸钠发酵培养基为每1L的海水中含磷酸氢二钾6g，磷酸二氢钾3g，硫酸铵1g，硝酸铵1g；

铁载体的富集和分离：将上述发酵液离心取上清液，将上清液与大孔树脂HP20振荡混合后，将混合液填入层析柱，以乙醇-水为洗脱剂进行梯度洗脱，收集洗脱组分，取紫外光激发下有荧光的组分合并，旋转蒸发浓缩至干，在甲醇-水溶液中，结晶，待大量棕黄色晶体析出后重结晶，过滤，冻干，即得到荧光铁载体PVD。

5.如权利要求4所述，其特征在于，所述假单孢属细菌Pseudomonas sp.SXM-1为将假单孢属细菌Pseudomonas sp.SXM-1菌种接种于海水LB培养基中恒温培养后的假单孢属细菌Pseudomonas sp.SXM-1培养液；所述海水LB培养基为胰蛋白胨10g，酵母提取物5g，氯化钠10g，1L海水。

6.如权利要求4所述具有荧光特性的铁载体PVD的制备方法，其特征在于，所述发酵种子液制备步骤中，所述恒温培养的时间为20-30小时，温度为28-32℃。

7.如权利要求6所述具有荧光特性的铁载体PVD的制备方法，其特征在于，所述培养的时间为24小时，温度为30℃。

8.如权利要求4所述具有荧光特性的铁载体PVD的制备方法，其特征在于，所述发酵种子液制备步骤中，所述海水为厦门市白城海滩的海水。

9.如权利要求4所述具有荧光特性的铁载体PVD的制备方法，其特征在于，所述接种培养步骤为，培养的条件为150-200rpm，28-32℃，70-75小时。

10.如权利要求9所述具有荧光特性的铁载体PVD的制备方法，其特征在于，所述培养的条件为180rpm，30℃，72小时。

11.如权利要求4所述具有荧光特性的铁载体PVD的制备方法，其特征在于，所述铁载体的富集和分离步骤中，所述离心的条件为8000rpm，20分钟。

12.如权利要求4所述具有荧光特性的铁载体PVD的制备方法，其特征在于，所述上清液和大孔树脂的加量比例为1L上清液：40g大孔树脂HP20。

13.如权利要求12所述具有荧光特性的铁载体PVD的制备方法，其特征在于，所述大孔树脂HP20为日本三菱大孔树脂DIAION的产品。

14.如权利要求4所述具有荧光特性的铁载体PVD的制备方法，其特征在于，所述振荡混合条件为30℃下振荡4小时，振荡转速为160rpm。