[发明专利]一种具有荧光特性的铁载体PVD、制备方法及其用途

说明书

本发明公开了一种具有荧光特性的铁载体PVD、制备方法及其用途。铁载体PVD通过假单胞菌属细菌Pseudomonas sp.SXM‑1制备得到，该铁载体PVD可耐受变性剂和蛋白酶K；耐受强还原剂DTT，强氧化剂；PVD对Ca²⁺、Mg²⁺和Zn²⁺稳定，对Mn²⁺，Co²⁺，Ni²⁺，Cu²⁺，Fe²⁺均引起荧光淬灭。

技术领域

本发明涉及化合物领域，尤其涉及一种具有荧光特性的铁载体PVD、制备方法及其用途。

背景技术

荧光性假单胞菌是一种广泛存在于自然界中的革兰氏阴性细菌，在缺乏游离三价铁离子的条件下，能分泌一种水溶性，黄绿色，发荧光，分子量约为1000到2000的小肽，能够与三价铁形成紧密的复合体并将三价铁转运至细菌细胞内。该类小肽被称为铁载体(pyoverdine)。随着人们对铁载体结构越来越感兴趣，研究表明，假单胞菌属不同菌种不同菌株产生不同的铁载体，同一菌株也可能产生一种或几种不同的铁载体。铁载体所呈现的结构多样性使其成为假单胞菌属系统发育与分类的重要工具，目前，已经有60多种铁载体结构被确定。喹啉生色团是目前发现的所有假单胞菌属来源的共同组成部分，它使得脓菌素具有黄绿色和荧光的特性，研究发现，与荧光基团氨基端相连的侧链是琥珀酸或其酰胺形式、苹果酸或其酰胺形式、α-酮戊二酸或谷氨酸。

发明内容

本发明的目的在于提供一种新的具有荧光特性的铁载体PVD。

为实现上述目的，本发明提供一种具有荧光特性的铁载体PVD，其特征在于，其结构式如式(A)所示，

本发明还保护所述具有荧光特性的铁载体PVD具有耐受变性剂，蛋白酶K，还原剂，氧化剂，Ca²⁺、Mg²⁺和Zn²⁺的用途。

本发明还保护所述具有荧光特性的铁载体PVD具有使Mn²⁺，Co²⁺，Ni²⁺，Cu²⁺，Fe²⁺荧光淬灭的用途。

本发明还提供一种所述具有荧光特性的铁载体PVD的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

发酵种子液制备：在海水LB培养基中接种假单孢属细菌Pseudomonas sp.SXM-1进行恒温培养，所得培养物作为种子液；优选的，所述假单孢属细菌Pseudomonas sp.SXM-1为将假单孢属细菌Pseudomonas sp.SXM-1菌种接种于海水LB培养基中恒温培养后的假单孢属细菌Pseudomonas sp.SXM-1培养液；所述海水LB培养基为胰蛋白胨10g，酵母提取物 5g，氯化钠10g，1L海水；

接种培养：采用液体发酵方式，在琥珀酸钠发酵培养基中接种上述种子液，于恒温培养箱中培养得到发酵液；所述琥珀酸钠发酵培养基为每1L的海水中含磷酸氢二钾6g，磷酸二氢钾3g，硫酸铵1g，硝酸铵1g；

铁载体的富集和分离：将上述发酵液离心取上清液，将上清液与大孔树脂HP20振荡混合后，将混合液填入层析柱，以乙醇-水为洗脱剂进行梯度洗脱，收集洗脱组分，取紫外光激发下有荧光的组分合并，旋转蒸发浓缩至干，在甲醇-水溶液中，结晶，待大量棕黄色晶体析出后重结晶，过滤，冻干，即得到荧光铁载体PVD。

进一步，所述发酵种子液制备步骤中，所述恒温培养的时间为20-30小时，温度为28-32℃；优选的，培养的时间为24小时，温度为30℃。

进一步，所述发酵种子液制备步骤中，所述海水为厦门市白城海滩的海水。