[发明专利]一种用于外泌体裂解和检测的微流控芯片及方法

权利要求书

1.一种用于外泌体裂解和检测的微流控芯片，其特征在于：包括上层控制层、中间流道层和功能化基底，所述中间流道层设有第一加样口（4）、裂解腔（7）、检测腔（8）和第二加样口（5）；所述第一加样口（4）与裂解腔（7）通过第一微流道（6）连接；裂解腔（7）与检测腔（8）通过第二微流道（14）连接；所述第二加样口（5）与所述第二微流道（14）连接；功能化基底包括裂解区、检测反应区和检测区。

2.根据权利要求1所述的用于外泌体裂解和检测的微流控芯片，其特征在于：所述的上层控制层包含若干阀门和进/出样口；以及连接所述阀门与进/出样口的流道。

3.根据权利要求2所述的用于外泌体裂解和检测的微流控芯片，其特征在于：所述的阀门包括设置在第一加样口（4）与裂解腔（7）之间的第一阀门（10）、裂解腔（7）与检测腔（8）之间的第二阀门（11）和第三阀门（12）、第二加样口（5）前方的第四阀门（13）。

4.根据权利要求1所述的用于外泌体裂解和检测的微流控芯片，其特征在于：所述的功能化基底上检测区对应检测腔（8）位置，修饰多聚赖氨酸；检测反应区对应第二微流道（14）位置，裂解区对应裂解腔（7）位置，检测反应区和裂解区修饰氧化石墨烯材料。

5.根据权利要求1-4任一项所述的用于外泌体裂解和检测的微流控芯片，其特征在于：所述的上层控制层、中间流道层为PDMS。

6.根据权利要求5所述的用于外泌体裂解和检测的微流控芯片，其特征在于：所述的上层控制层厚度为4-8mm。

7.根据权利要求5所述的用于外泌体裂解和检测的微流控芯片，其特征在于：所述的中间流道层的厚度为10-20 μm。

8.根据权利要求1-4任一项所述的用于外泌体裂解和检测的微流控芯片，其特征在于：所述的功能化基底层为玻璃材质或其它具有高反射性的基底。

9.一种外泌体裂解和检测的方法，其特征在于，包括：

（1）将含有核酸探针的溶液注入到第二加样口（5），采用氮气将核酸探针溶液吹入到微流道内，孵育一段时间，核酸探针被功能化基底上的氧化石墨烯吸附；（2）将特异性捕获外泌体表面蛋白的抗体注入到裂解腔（7）中，并孵育一段时间，抗体被功能化基底上的氧化石墨烯吸附；（3）将包含外泌体的生物样本注入到第一加样口（4），采用氮气将生物样本经微流道吹入到裂解腔（7）中，孵育一段时间后，外泌体被底部的抗体捕获；（4）将裂解液加入到裂解腔（7）中，孵育一段时间后，外泌体被裂解，内部的核酸被释放；（5）采用氮气从第一加样口（4）将裂解腔（7）中包含核酸的溶液吹到第二微流道（14）中，并孵育一段时间，外泌体释放的核酸与基底上的核酸探针结合；（6）采用氮气从第一加样口（4）将第二微流道（14）内的结合后的双链溶液吹入到检测腔（8）中，孵育一段时间后，双链被固定在多聚赖氨酸基底上，然后进行检测。

10.根据权利要求9所述的外泌体裂解和检测的方法，其特征在于，所述的核酸探针带有荧光基团。