[发明专利]一种三维TSPCs球体肌腱向分化诱导培养基及分化培养方法在审
| 申请号： | 202010554996.6 | 申请日： | 2020-06-17 |
| 公开（公告）号： | CN111778207A | 公开（公告）日： | 2020-10-16 |
| 发明（设计）人： | 刘燕;王禹 | 申请（专利权）人： | 北京大学口腔医学院 |
| 主分类号： | C12N5/0775 | 分类号： | C12N5/0775;C12N5/077 |
| 代理公司： | 南京中律知识产权代理事务所(普通合伙) 32341 | 代理人： | 沈振涛 |
| 地址： | 100000 北*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 三维 tspcs 球体 肌腱 分化 诱导 培养基 培养 方法 | ||
1.一种三维TSPCs球体肌腱向分化诱导培养基，其特征在于：所述培养基为含有TGF-β1、GDF5、维生素C、地塞米松、胰岛素的DMEM培养基。
2.根据权利要求1所述的三维TSPCs球体肌腱向分化诱导培养基，其特征在于：其中，TGF-β1的浓度为5-20ng/ml，GDF5的浓度为5-20ng/ml，维生素C浓度为0.2-0.8μM，地塞米松的浓度为35-65μM、胰岛素的浓度为7-15μM。
3.根据权利要求2所述的三维TSPCs球体肌腱向分化诱导培养基，其特征在于：其中，TGF-β1的浓度为15ng/ml，GDF5的浓度为10ng/ml，维生素C浓度为0.5μM，地塞米松的浓度为50μM、胰岛素的浓度为10μM。
4.一种TSPCs的三维球体体外培养方法，其特征在于：TSPCs于DMEM培养基中重悬，置于一定浓度CO2的恒温孵箱中培养；待TSPCs至80-90％融合后，接种于低粘附培养皿中，加入1-3％低浓度的胎牛血清、10-30ng/ml bFGF以及30-40ng/ml EGF生长因子，置于一定浓度CO2的恒温孵箱中培养，即得TSPCs的三维球体。
5.根据权利要求4所述的TSPCs的三维球体体外培养方法，其特征在于：其中选用加入2％低浓度的胎牛血清、20ng/ml bFGF以及36ng/ml EGF生长因子。
6.一种三维TSPCs球体肌腱向分化培养方法，其特征在于：将TSPCs的三维球体置于离心管中，通过差异性梯度离心的方法去除散在的单个细胞和废弃的培养基；轻柔加入诱导培养基，转移至铺有Matrigel的正常粘附培养皿中培养。
7.根据权利要求6所述的一种三维TSPCs球体肌腱向分化培养方法，其特征在于：所述培养基为含有TGF-β1、GDF5、维生素C、地塞米松、胰岛素的DMEM培养基。
8.根据权利要求7所述的一种三维TSPCs球体肌腱向分化培养方法，其特征在于：其中，TGF-β1的浓度为5-20ng/ml，GDF5的浓度为5-20ng/ml，维生素C浓度为0.2-0.8μM，地塞米松的浓度为35-65μM、胰岛素的浓度为7-15μM。
9.根据权利要求8所述的一种三维TSPCs球体肌腱向分化培养方法，其特征在于：其中，TGF-β1的浓度为15ng/ml，GDF5的浓度为10ng/ml，维生素C浓度为0.5μM，地塞米松的浓度为50μM、胰岛素的浓度为10μM。
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