[发明专利]一种用于copA和czcD基因双重荧光定量PCR检测的引物和探针组及试剂盒

权利要求书

1.一种用于铜耐受基因copA荧光PCR检测的引物组，其特征在于：引物组包括，

上游引物copA-F：5’ATYGAGCTKCATYTGACCGG 3’，如SEQ ID NO.1所示；

下游引物copA-R：5’ATYTTCMAGKTCRCTCCACATGCC 3’，如SEQ ID NO.2所示；

探针copA-P：5’TGSATBGGRTGSGYCATCATVSTGTC 3’，如SEQ ID NO.3所示；探针的5’端标记有FAM荧光基团，3’端标记BHQ1基团。

2.一种用于镉耐受基因czcD荧光PCR检测的引物和探针组，其特征在于：包括，

上游引物czcD-F：5’CGACGCCGCGCACATG 3’，如SEQ ID NO.4所示；

下游引物czcD-R：5’TANCCSSCGACGCCGA 3’，如SEQ ID NO.5所示；

探针czcD-P：5’CCGCGCCGARRTSCTCG 3’，如SEQ ID NO.6所示；探针的5’端标记有VIC荧光基团，3’端标记BHQ1基团。

3.根据权利要求1所述的用于copA基因荧光PCR检测的引物组，其特征在于：所述引物根据copA基因序列进行设计，该靶片段的序列如SEQ ID NO.7所示。

4.根据权利要求2所述的用于czcD基因荧光PCR检测的引物和探针组，其特征在于：所述引物和探针根据czcD基因序列进行设计，该靶片段的序列如SEQ ID NO.8所示。

5.一种用于copA和czcD基因双重荧光定量PCR检测的试剂盒，其特征在于：包括PCR反应液、混合酶液、阳性标准品、弱阳性质控品和强阳性质控品；所述PCR反应液包括引物和探针；

所述引物为：上游引物copA-F：5’ATYGAGCTKCATYTGACCGG 3’，如SEQ ID NO.1所示；下游引物copA-R：5’ATYTTCMAGKTCRCTCCACATGCC 3’，如SEQ ID NO.2所示；上游引物czcD-F：5’CGACGCCGCGCACATG 3’，如SEQ ID NO.4所示；下游引物czcD-R：5’TANCCSSCGACGCCGA 3’，如SEQ ID NO.5所示；

所述探针为：探针copA-P：5’TGSATBGGRTGSGYCATCATVSTGTC 3’，如SEQ ID NO.3所示；探针czcD-P：5’CCGCGCCGARRTSCTCG 3’，如SEQ ID NO.6所示；探针的5’端标记有荧光基团，3’端标记有BHQ1基团，且探针copA-P和探针czcD-P分别采用不同荧光发光基团进行标记；

所述阳性标准品、弱阳性质控品和强阳性质控品均包括含有copA和czcD基因片段的重组质粒。

6.根据权利要求5所述的用于copA和czcD基因双重荧光定量PCR检测的试剂盒，其特征在于：所述PCR反应液包括浓度为0.3-0.5mM含dUTP的dNTPs、2-6mM的Mg₂SO₄、2％-8％的海藻糖、1％-4％DMSO、0.2％-1％甜菜碱、0.5％-2％的BSA、0.1-1nM纳米金(直径2nm-10nm)、0.2-0.8μM的引物和0.2-0.5μM的探针。

7.根据权利要求5所述的用于copA和czcD基因双重荧光定量PCR检测的试剂盒，其特征在于：所述混合酶液包括3-6U的HotStart Taq酶和0.2-0.4U的UNG酶。