[发明专利]用于检测裸盖鱼的RPA引物、探针及检测方法

权利要求书

1.一种基于重组酶聚合酶扩增技术检测裸盖鱼的方法，其特征在于，包括如下步骤：

步骤A: 在重组酶聚合酶扩增技术的反应液中加入裸盖鱼的RPA引物探针，及样品提取的核酸；

步骤B: 通过恒温扩增仪进行重组酶聚合酶扩增反应，同时进行实时荧光采集，通过实时荧光值的变化曲线获得样品的裸盖鱼成分检测情况;

所述引物和探针序列如下：

上游引物：

5’- TTCGCCAGCTCTCACTGACTACTCGCATGAATGGG -3’

下游引物：

5’- TCCTGTGGCTTGTGTGAGGAAGTACTTGGTGGAGG -3’

探针序列：

5’-TCGAAATGAACACGCTTGCTATTATCCCCTTAATAGCACAGCATCACCACCCAC -3’；

所述探针距5’端32bp 的位置处采用dSpacer 修饰，dSpacer分子两侧的距5’端31bp和34bp 位置的胸腺嘧啶分别被荧光基团FAM和淬灭基团BHQ1修饰，并且在探针的3’末端通过阻塞基团C3 Spacer修饰；

所述重组酶聚合酶扩增反应使用的扩增温度为37-42℃，使用的扩增时间为15-25min。