[发明专利]一种基于磁珠载体双抗夹心ELISA的考古现场快速检测痕量丝素蛋白的方法

权利要求书

1.一种基于磁珠载体双抗夹心ELISA的考古现场快速检测痕量丝素蛋白的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)将羧基聚合物磁珠悬浮在缓冲液中，加入经抗体稀释液稀释的鼠单克隆抗体IgA，进行鼠单克隆抗体IgA与磁珠的偶联；偶联完成后，进行磁性分离洗涤，弃上清，获得免疫磁珠；

(2)加入待测样品，孵育，磁性分离洗涤，弃上清，获得丝素蛋白结合磁珠；

(3)加入经抗体稀释液稀释的抗丝素蛋白的一抗，孵育，磁性分离洗涤，弃上清，获得丝素蛋白双抗夹心磁珠；

(4)加入经抗体稀释液稀释的抗一抗的酶标二抗，孵育，磁性分离洗涤，弃上清，获得二抗结合磁珠；

(5)加入显色液进行显色；

(6)显色结束后，磁性分离出上清液，向上清液中加入终止液，进行光密度值测试；

(7)根据测得的光密度值结合标准曲线，即可获得待测样品中的丝素蛋白浓度。

2.如权利要求1所述的一种基于磁珠载体双抗夹心ELISA的考古现场快速检测痕量丝素蛋白的方法，其特征在于：

步骤(3)中，所述一抗为兔多克隆抗体；和/或

步骤(4)中，所述酶标二抗为羊抗兔-HRP。

3.如权利要求1所述的一种基于磁珠载体双抗夹心ELISA的考古现场快速检测痕量丝素蛋白的方法，其特征在于：

步骤(1)中，鼠单克隆抗体IgA与抗体稀释液的体积比为1:8～10；和/或

步骤(3)中，一抗与抗体稀释液的体积比为1:1000～1500；和/或

步骤(4)中，二抗与抗体稀释液的体积比为1:4000～6000；和/或

步骤(1)中，所述缓冲液为95～105mM MES；和/或

步骤(1)、(3)和(4)中，所述抗体稀释液为95～105mM MES。

4.如权利要求1所述的一种基于磁珠载体双抗夹心ELISA的考古现场快速检测痕量丝素蛋白的方法，其特征在于：

步骤(1)中，偶联温度为4～5℃，时间为8～12h，或偶联温度为35～40℃或室温，时间为1.5～2.5h；和/或

步骤(2)中，孵育温度为35～40℃，时间为1～2h；和/或

步骤(3)中，孵育温度为35～40℃，时间为0.5～1h；和/或

步骤(4)中，孵育温度为35～40℃，时间为0.5～1h。

5.如权利要求1所述的一种基于磁珠载体双抗夹心ELISA的考古现场快速检测痕量丝素蛋白的方法，其特征在于：

步骤(1)中，鼠单克隆抗体IgA与羧基聚合物磁珠的质量比为45～90μg:1mg；和/或

步骤(2)中，免疫磁珠的用量为25～100μg。

6.如权利要求3所述的一种基于磁珠载体双抗夹心ELISA的考古现场快速检测痕量丝素蛋白的方法，其特征在于，步骤(1)中，鼠单克隆抗体IgA与抗体稀释液的体积比为1:9；步骤(3)中，一抗与抗体稀释液的体积比为1:1500；步骤(4)中，二抗与抗体稀释液的体积比为1:4000；步骤(1)中，偶联温度为4℃，时间为10h；步骤(2)中，孵育温度为37℃，时间为1h；步骤(3)和步骤(4)中，孵育温度为37℃，时间为0.5h；步骤(1)中，鼠单克隆抗体IgA与羧基聚合物磁珠的质量比为67.5μg:1mg；步骤(2)中，免疫磁珠的用量为50μg。

7.如权利要求6所述的一种基于磁珠载体双抗夹心ELISA的考古现场快速检测痕量丝素蛋白的方法，其特征在于，通过以下方法获得步骤(7)中所述标准曲线：将步骤(2)中的待测样品换成浓度为10^-2、10^-1、10⁰、10¹、10²、10³、10⁴、10⁵、10⁶ng/mL的丝素蛋白溶液，重复步骤(1)～(6)；然后以丝素蛋白浓度为x轴，以光密度值为y轴，进行线性拟合获得标准曲线。