[发明专利]一种基于磁珠载体双抗夹心ELISA的考古现场快速检测痕量丝素蛋白的方法

说明书

本发明涉及蛋白质检测技术领域，公开了一种基于磁珠载体双抗夹心ELISA的考古现场快速检测痕量丝素蛋白的方法，包括以下步骤：（1）将鼠单克隆抗体IgA与磁珠偶联，获得免疫磁珠；（2）加入待测样品，孵育，获得丝素蛋白结合磁珠；（3）加入一抗，孵育，获得丝素蛋白双抗夹心磁珠；（4）加入酶标二抗，孵育，获得二抗结合磁珠；（5）加入显色液进行显色；（6）磁性分离出上清液，向上清液中加入终止液，进行光密度值测试，结合标准曲线，即可获得待测样品中的丝素蛋白浓度。本发明通过将磁珠与双抗夹心ELISA结合，并利用鼠单克隆抗体IgA制备免疫磁珠，实现了痕量丝素蛋白的检测，且操作便捷，耗时较短。

技术领域

本发明涉及蛋白质检测技术领域，尤其涉及一种基于磁珠载体双抗夹心ELISA的考古现场快速检测痕量丝素蛋白的方法。

背景技术

丝绸作为中华文明的重要发明之一，承载着极其丰富的文化、技术和社会内涵,(，)为考古学、历史学、技术史的研究提供了珍贵的资料。已出土的丝绸残片表明丝绸的起源应不晚于5500年前。然而，从发现蚕丝纤维到将其织造成精美的丝绸必然需要长时间的发展。因此，我们的祖先开始使用蚕丝纤维的时间很可能远早于5500年前。

丝绸的原料是纤维丝素蛋白，长时间的埋藏过程中纤维丝素蛋白本身很难完整的保存下来，这给探寻丝绸的起源与发展带来了极大的障碍。如何在丝绸宏观形态消失的情况下探寻更早的证据成为了研究早期丝绸的关键问题。相对于完整的丝织物，无形的纤维丝素蛋白残留物更有可能保存下来，也有可能成为探寻早期蚕丝遗存的新证据。

在长达数百年甚至数千年的时间长河中，考古材料中剩余的丝绸含量微乎其微，因此在样品进行检测之前对考古材料中痕量丝素蛋白进行富集，以提高检测的准确性，同时又要考虑操作上的简便以及耗时少的问题。

目前检测痕量丝素蛋白的方法有多种，其中ELISA检测方法是利用抗原抗体的特异性结合进行检测，也是丝素蛋白生物检测的最新技术，但ELISA检测方法需要检测目标物丝素蛋白能够有一定的浓度和固相载体作为支撑，而在考古发掘样品中的丝蛋白经过长期的岁月和环境的侵蚀，泥土中残余的丝素蛋白含量微乎其微，而且可能被分解成不同的片段，常用的溶液提取法很难得到足够的丝素蛋白。

公开号为CN108387435A的中国专利文献公开了一种痕量丝素蛋白富集方法，包括以下步骤：(1)不同丝素蛋白单克隆抗体的混合；(2)偶联反应；(3)免疫磁珠的获得；(4)鉴定，确定偶联状态；(5)偶联后免疫磁珠的丝素蛋白单克隆抗体固定化；(6)丝素蛋白单克隆抗体免疫磁珠与丝素蛋白的结合；(7)丝素蛋白的洗脱；(8)ELISA检测；(9)加标回收。该方法通过免疫磁珠可进行痕量丝素蛋白富集，但富集后需进行洗脱然后用ELISA检测，过程较为复杂且时间较长。

发明内容

为了解决上述技术问题，本发明提供了一种基于磁珠载体双抗夹心ELISA的考古现场快速检测痕量丝素蛋白的方法。通过将磁珠与双抗夹心ELISA结合，本发明能检测痕量丝素蛋白，且操作便捷，耗时较短。

本发明的具体技术方案为：

一种基于磁珠载体双抗夹心ELISA的考古现场快速检测痕量丝素蛋白的方法，包括以下步骤：(1)将羧基聚合物磁珠悬浮在缓冲液中，加入经抗体稀释液稀释的鼠单克隆抗体IgA，进行鼠单克隆抗体IgA与磁珠的偶联；偶联完成后，进行磁性分离洗涤，弃上清，获得免疫磁珠；

(2)加入待测样品，孵育，磁性分离洗涤，弃上清，获得丝素蛋白结合磁珠；

(3)加入经抗体稀释液稀释的抗丝素蛋白的一抗，孵育，磁性分离洗涤，弃上清，获得丝素蛋白双抗夹心磁珠；

(4)加入经抗体稀释液稀释的抗一抗的酶标二抗，孵育，磁性分离洗涤，弃上清，获得二抗结合磁珠；

(5)加入显色液进行显色；