[发明专利]抗MET和RON双特异性抗体及其抗体-药物偶联物的制备和应用

权利要求书

1.一种抗MET和RON的双特异性抗体，其包含抗MET的抗体片段和抗RON的抗体片段，抗MET的抗体片段和抗RON的抗体片段通过化学“凸点-嵌入-凹穴”相连接。

2.根据权利要求1所述的双特异性抗体，其特征在于：抗RON抗体片段，氨基酸序列中393号氨基酸T突变为W；抗MET抗体片段，氨基酸序列中440号氨基酸Y突变为V，同时重链可变区中CH1与轻链可变区CL发生交换。

3.根据权利要求1所述的双特异性抗体，其特征在于：包含特异性识别和结合细胞表面抗原MET的结构域，其包括抗MET特异性抗体的重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:27所示，轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:28所示。

4.根据权利要求4所述的双特异性抗体，其特征在于：

其中

免疫球蛋白重链可变区包括：

CDRH1，其包含SEQ ID NO：7的氨基酸序列；

CDRH2，其包含SEQ ID NO：8的氨基酸序列；

CDRH3，其包含SEQ ID NO：9的氨基酸序列；

免疫球蛋白轻链可变区包括：

CDRH1，其包含SEQ ID NO：10的氨基酸序列；

CDRH2，其包含SEQ ID NO：11的氨基酸序列；

CDRH3，其包含SEQ ID NO：12的氨基酸序列。

5.根据权利要求1所述的双特异性抗体，其特征在于：特异性识别和结合细胞表面抗原RON的结构域，其包括抗RON特异性抗体的重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:31所示，轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:32所示。

6.根据权利要求5所述的双特异性抗体，其特征在于：

其中，

免疫球蛋白重链可变区包括：

CDRH1，其包含SEQ ID NO：19的氨基酸序列；

CDRH2，其包含SEQ ID NO：20的氨基酸序列；

CDRH3，其包含SEQ ID NO：21的氨基酸序列；

免疫球蛋白轻链可变区包括：

CDRH1，其包含SEQ ID NO：22的氨基酸序列；

CDRH2，其包含SEQ ID NO：23的氨基酸序列；

CDRH3，其包含SEQ ID NO：24的氨基酸序列。

7.根据权利要求2-6任一所述的双特异性抗体，其特征在于：所述任一氨基酸序列至少95％同一性并保留相应生物活性的变体序列或经删除、替换和/或添加一个或多个氨基酸残基后获得的保留相应活性的变体序列。

8.一种抗体结合片段，其特征在于：包括SEQ ID NO：27，SEQ ID NO：28，SEQ ID NO：31或SEQ ID NO：32所示的抗原结合结构域中的任意一种或多种。

9.一种制备权利要求1-7任一所述抗MET和RON双特异性抗体或权利要求8所述抗体结合片段的方法，该方法包括：表达在一定条件下能同时特异性结合人MET和RON受体结构域的免疫球蛋白重链可变区或免疫球蛋白轻链可变区或两者都有，在宿主细胞表达包含免疫球蛋白重链可变区或免疫球蛋白轻链可变区或两者都有的多肽序列，从而生产的抗体或其结合片段，以及纯化上述的抗体或其结合片段。

10.一种分离的多肽或其结合片段，其特征在于：能同时特异性结合人MET和RON受体结构域，其中包含免疫球蛋白重链可变区和/或免疫球蛋白轻链可变区，与PCMdt-02双特异性抗体的重链和轻链的互补决定区(CDRs)氨基酸序列至少具有至少95％同源性。

11.根据权利要求10所述的多肽或其结合片段，其特征在于：所述的CDRs序列之间插入人或人源化框架序列。