[发明专利]抗MET和RON双特异性抗体及其抗体-药物偶联物的制备和应用

说明书

本发明属于生物制药领域，更具体地说，涉及抗MET和RON双特异性抗体及其抗体‑药物偶联物的制备方法和应用。一种抗MET和RON的双特异性抗体，其包含抗MET的抗体片段和抗RON的抗体片段，抗MET的抗体片段和抗RON的抗体片段通过特定的化学“凸点‑嵌入‑凹穴”(knobs‑and‑holes)相连接。

技术领域

本发明属于生物制药领域，更具体地说，涉及抗MET和RON双特异性抗体及其抗体-药物偶联物的制备方法和应用。

背景技术

肝细胞生长因子受体(MET)和巨嗜细胞刺激蛋白受体(RON)属于受体型酪氨酸激酶的一个独特的亚家族，他们具有相似的结构和功能。自从Met和RON分别在1987年和1993年被发现以来，他们在癌症中的作用已经在各种模型系统中被研究，包括遗传、转录组学、蛋白质组学和肿瘤微环境，这些研究表明了它们在肿瘤起始、进展、恶性和干性中的重要性。病理上，MET和/或RON的表达增加存在于各种类型的癌症中，包括结直肠癌、乳腺癌、肺癌和胰腺癌。MET和RON在原发性肿瘤中的过度表达也与病理生理参数相关，可作为预测患者生存和化疗反应的生物标志物。在细胞水平上，异常的MET和/或RON激活可以促进癌细胞侵袭生长、远处转移、化疗耐药和致瘤干性。这些活动通过不同的细胞内信号通路传导，如丝裂原活化蛋白激酶和磷脂酰肌醇3激酶通路。根据这些发现，MET和RON被认为是肿瘤发生的关键决定因素。此外，两种受体均已被证实可作为治疗具有MET和/或RON表达和信号改变的癌症的药物靶点。

MET和RON靶向治疗的临床应用一直在深入研究中。小分子激酶抑制剂(SMKIs)和治疗性单克隆抗体(TMAB)都已被开发出来。几种SMKI，如Cabozantinib和Crizotinib，已被FDA批准用于临床。由于MET和RON在结构上具有相似性，几乎所有靶向MET的SMKI也同样对RON有特异性。针对MET的TMAB，如ABT-700，SAIT301和Sym015，目前正在进行临床试验。同样还开发了针对RON的TMAB，例如IMC41A10、ZT/f2、6E6和narnatumab。Narnatumab进行了临床试验，但由于缺乏治疗效果而终止了。最近报道了一种使用针对MET和/或RON的抗体-药物偶联物(ADC)的策略。MET特异性ADC包括ABBV-399，TR1801-ADC和SHR-A1403等最近已进入临床试验(www.clinicaltrials.gov)。针对RON的ADC，如ZT/G4-单甲基瑞奥西汀E(ZT/G4-MMAE)和PCM5B14-DCM(PCM5B14-DCM)等也已被报道。累积结果表明，抗MET和抗RON ADC在灵长类动物体内均能有效地抑制和/或根除由不同类型的癌细胞株介导的异种移植瘤，并具有良好的药代动力学特征和可控的毒理活性。显然，这些发现奠定了抗MET和抗RON ADC作为癌症治疗新策略的基础。

近几年，国内在ADC药物的研发上有了长足的进步。多家科研单位和药物企业分别针对不同的药物靶点，采用特异性单克隆抗体积极地开展新型抗癌药物ADC的研发。抗体偶联药物的成功开发依赖于选择合适的抗原靶点,使该类药物的抗体部分可以与之特异性高活性结合,新靶点抗原应在肿瘤中的表达水平较高,在正常组织中的表达很少或不表达,或仅在特定组织类型中有表达,以提高药物的安全性和有效性。双特异性抗体又称为双功能抗体，是近年来肿瘤基因治疗的又一个研究热点。它有两个抗原结合部位,可分别结合两种不同的抗原表位。

本发明在罗氏公司的crossmab技术在Knobs-into-holes(KiH)方案的基础上，进一步解决了轻链错误联结的问题，简单的说，该技术首先在Fc区设计了特定的化学“凸点-嵌入-凹穴”(Knobs-into-holes)异源二聚体连结；同时将Fab区域的CH1和CL互换，以减少轻链错配。

本发明RON和MET的双重靶向优于单独抑制任一靶点。RON和MET是可以作为ADC药物合适的抗原靶点。通过CrossMab技术构建的抗MET和RON双特异性抗体将有助于肿瘤特异性靶向治疗。

发明内容