[发明专利]一种纳米酶标记直接竞争仿生免疫分析检测组胺的方法

说明书

本发明公开了一种纳米酶标记直接竞争仿生免疫分析检测组胺的方法，具体涉及纳米材料、生物催化及分析化学技术领域。本发明以铂纳米材料代替天然酶作为标记物，采用分子印迹技术与纳米酶相结合实现对组胺的高灵敏检测。本发明操作简单，方法稳定，选择性高，对其他生物胺类(酪胺、色胺)无明显响应，适用于食品中组胺的快速检测。

技术领域

本发明涉及组胺的检测方法，特别是涉及一种纳米酶标记直接竞争仿生免疫分析检测组胺的方法，属于食品安全检测技术领域。

背景技术

组胺(Histamine，HA)又名组织胺，它是在微生物和组氨酸脱羧酶共同作用下，由蛋白质降解产生的组氨酸发生脱羧作用而产生的，广泛存在于各种食品及生物体中，尤其是发酵食品(如：大豆发酵制品、酸奶、啤酒等)中。人食用含有高水平组织胺的食物后可能会导致类似过敏的食物中毒。组胺过敏不仅会导致局部或全身毛细管扩张，使毛细管壁的通透性增加，从而诱发高血压。还会引发支气管收缩，使人体产生胸闷。过敏症状表现为头痛、恶心、呼吸紊乱等，严重时甚至危及生命。

过量的组胺给人体健康构成了潜在威胁，对我国产品出口也带来了挑战。目前，针对组胺含量的检测方法主要包括：高效液相色谱法、荧光分光光度法与质谱联用等。这些方法既繁琐又耗时，所用的检测设备价格昂贵，不适用于现场快速检测需求。

酶联免疫分析法是一种广泛用于检测组胺的方法，但由于传统生物抗体制备困难、成本高，使得其应用受到了限制。分子印迹聚合物由于其稳定性好、特异性强等优点，可作为仿生抗体代替传统生物抗体应用于免疫分析。但传统的聚合方法存在位点包埋等现象，对目标物吸附能力和洗脱效果差。此外，传统酶易失活，在环境中不稳定，而且传统酶通常是大分子物质，与目标物连接后限制其接近聚合物的结合位点，对其使用造成极大限制。

发明内容

针对上述现有技术所存在的问题，本发明的目的是提供一种纳米酶标记直接竞争仿生免疫分析检测组胺的方法。本发明以Pt@SiO₂纳米材料代替天然酶标记抗原，以多孔芳香骨架材料(PAF-45)为支持载体的分子印迹聚合物作为仿生抗体，实现了对组胺的灵敏检测；而且本发明样品分析时间短、操作简单，方法稳定，适用于食品中组胺的快速检测。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种纳米酶标记直接竞争仿生免疫分析检测组胺的方法，包括以下步骤：

(1)采用Pt@SiO₂纳米材料标记抗原，以PAF-45为支持载体的分子印迹聚合物作为仿生抗体，将Pt@SiO₂纳米材料标记抗原、仿生抗体和系列浓度梯度的组胺标样溶液混合，室温竞争反应30-50min，取上清液，加入TMB底物溶液进行显色反应，用酶标仪在450nm波长下读取紫外吸收值，计算抑制率；以组胺标样溶液浓度对数值为横坐标，抑制率为纵坐标，绘制标准曲线；

(2)利用步骤(1)绘制的工作曲线对经前处理的待测物中的组胺含量进行检测。

优选的，步骤(1)中，所述Pt@SiO₂纳米材料标记抗原具体如下：

将Pt@SiO₂材料和戊二醛混合0.5～1h；加入组胺溶液，继续反应3～5h，反应结束后，离心分离，洗涤，得到Pt@SiO₂纳米材料标记抗原。

更优选的，所述Pt@SiO₂材料由如下方法制备而成：

将H₂PtCl₆·6H₂O水溶液、聚乙烯吡咯烷酮和乙醇混合，在100℃下加热回流2-4h，冷却，制备得到PtNPs；