[发明专利]冻干医用敷料的制备方法和冻干医用冷敷贴

权利要求书

1.一种冻干医用敷料的制备方法，其特征在于，包括：

以表达载体T7启动子-lac操纵子-目的蛋白-6xHis-T7标记区-6xHis-T7终止子,附加体lac-rop-bom-ori-kanR,ori系统构建并合成质粒；

将所述质粒与感受态细菌悬液混匀，并进行培养；

将经由IPTG诱导后的菌液进行发酵，并洗脱得到所述目的蛋白；

以重量份计，加入2份寡肽-1、0.5份D-柠檬烯、1份甘油、0.5份所述目的蛋白、5份透明质酸钠、1份HA－800透明质酸、0.5份神经酰胺、1份银耳提取物、0.15份EDTA-二钠和1份壳聚糖；

加入纯水定容至所需重量，将混合液进行剪切和脱气后采用低温蒸发蒸干及冻干操作，具体步骤包括：

将所需量的原料置于烧杯中进行湿混并定容；

采用高剪切混合乳化机对原料进行剪切；

将剪切后的原料转移至脱气瓶中，并在磁力搅拌下抽真空脱气至无气泡为止；

将混合物在4-8℃、真空度100毫巴的条件下蒸发蒸干20分钟；

将混合物在液氮下速冻，设置低温冻干箱的冷阱温度为-40度，真空度为0.1毫巴，板层温度为-20度，混合物在-110度冻干15分钟后，板层温度由-20度升至8度，继续冻干60分钟，压升试验合格后，由所述冻干箱取出成固体，实现冷冻干燥，形成冻干医用敷料。

2.根据权利要求1所述的冻干医用敷料的制备方法，其特征在于，所述将所述质粒与感受态细菌悬液混匀并进行培养具体包括：

将感受态细菌悬液加入离心管中，置于冰上；

向所述离心管中加入所述质粒，并用移液器轻柔混匀，冰上静置20-30分钟；

向所述离心管中加入LB液体培养基，混匀后在37℃环境下振荡培养；

取所述离心管中的细菌培养液涂布至含有卡那霉素的LB固体培养基上；

在37℃环境下倒置培养12-16小时，菌落生长良好而未互相重叠时取出；

将所述菌落接种至LA液体培养基中，在37℃环境下以200rpm振摇培养；

培养至OD600达到0.6-0.8时，加入IPTG进行诱导，并置于37℃摇床继续培养4小时。

3.根据权利要求1所述的冻干医用敷料的制备方法，其特征在于，所述将经由IPTG诱导后的菌液进行发酵并洗脱得到所述目的蛋白具体包括：

将诱导后的菌液加入含有卡那霉素的LB液体培养基中，在37℃环境下振荡培养，待LB液体培养基浑浊后倒入发酵罐中发酵12-24小时；

取出发酵后的LB液体培养基装入离子交换柱，根据所述目的蛋白进行条件选择，洗脱得到所述目的蛋白。

4.根据权利要求1所述的冻干医用敷料的制备方法，其特征在于，所述目的蛋白包括寡肽-1、碱性成纤维蛋白、角质蛋白、胶原蛋白、纤维连接蛋白、原纤蛋白、再生蛋白、转化因子、胰岛素样生长因子和转化因子、透明质酸、白介素、干扰素、肿瘤坏死因子、穿孔素和细胞毒因子。

5.根据权利要求1所述的冻干医用敷料的制备方法，其特征在于，剪切工艺过程的剪切速率为2000rpm，剪切时间为30分钟。

6.一种冻干医用冷敷贴，其特征在于，利用如上述权利要求1至5中任一项所述的冻干医用敷料的制备方法所制备出的冻干医用敷料，将所述冻干医用敷料均匀敷设于膜布上，形成冻干医用冷敷贴。