[发明专利]冻干医用敷料的制备方法和冻干医用冷敷贴

说明书

本发明公开了一种冻干医用敷料的制备方法和冻干医用冷敷贴，制备方法包括：以表达载体T7启动子‑lac操纵子‑目的蛋白‑6xHis‑T7标记区‑6xHis‑T7终止子,附加体lac‑rop‑bom‑ori‑kanR,ori系统构建并合成质粒；将质粒与感受态细菌悬液混匀培养；将菌液由IPTG诱导、发酵、洗脱得到目的蛋白；加入寡肽‑1、D‑柠檬烯、甘油、目的蛋白、透明质酸钠、HA－800透明质酸、神经酰胺、银耳提取物、EDTA‑二钠和壳聚糖，对混合液剪切、脱气、低温蒸发蒸干、冻干，形成冻干医用敷料。通过本发明的技术方案，提高了目的蛋白的纯度、活性、适用性，提高了冷敷贴的稳定性，提高了活性物质的利用率，使用灵活。

技术领域

本发明涉及医用材料及生物技术领域，尤其涉及一种冻干医用敷料的制备方法和一种冻干医用冷敷贴。

背景技术

医用敷料常用于覆盖疮、伤口或其他损害的医用材料，包括天然纱布、合成纤维类敷料等。医用敷料能防止伤口再伤害，对伤口的温度和湿度进行妥善调节，减少并发症和防止自然愈合过程中的感染现象。但现有的敷料仍存在吸收渗液能力差、透气性差、抑菌效果较差等缺点，除此之外，这类产品携带不方便，无法随时随地使用，伤口愈合后皮肤愈合效果不佳。

发明内容

针对上述问题中的至少之一，本发明提供了一种冻干医用敷料的制备方法和冻干医用冷敷贴，适用于闭合性软组织的物理退热、冷敷理疗，通过冷敷贴所含成分带走热量，可以达到局部降温，其中的功效成分与空气接触迅速吸收空气中的水分形成水凝胶，通过水合作用，可以使功效成分迅速穿透脂肪层，渗透到皮下组织，直达病灶部位，作用于患处，达到冷敷祛痛、经皮吸收、缓释给药的效果。本发明采用构建的包括目的蛋白的质粒在原核生物细菌中进行培养，诱导产生大量稳定的目的蛋白，降低工业成本的同时保证原料的纯度与活性，且不同的目的蛋白能够应用于不同作用的产品。本发明制备的医用敷料中不含水分，无需添加防腐剂，可以减少因防腐剂引起的皮肤伤害或过敏现象；使用比较灵活，润湿时间快速，放在皮肤表面后即可使用。另外，本发明采用低温蒸发蒸干处理，既保证了外泌体的活性，又大大降低了水结晶时产生的冰晶对蛋白的破坏作用，从始至终维持低温对活性物质形成了良好的保护，减少了热敏性物质的损失，敷料中一些易氧化的物质得到了保护，从而提高了活性物质的利用率，提高了冷敷贴的稳定性。

为实现上述目的，本发明提供了一种冻干医用敷料的制备方法，包括：以表达载体T7启动子-lac操纵子-目的蛋白-6xHis-T7标记区-6xHis-T7终止子,附加体lac-rop-bom-ori-kanR,ori系统构建并合成质粒；将所述质粒与感受态细菌悬液混匀，并进行培养；将经由IPTG诱导后的菌液进行发酵，并洗脱得到所述目的蛋白；以重量份计，加入0.1-10份寡肽-1、0.1-10份D-柠檬烯、0.1-10份甘油、0.1-10份所述目的蛋白、0.1-10份透明质酸钠、1-10份HA－800透明质酸、0.1-10份神经酰胺、0.5-5份银耳提取物、0.1-1份EDTA-二钠和0.1-2份壳聚糖；加入纯水定容至所需重量，将混合液进行剪切和脱气后采用低温蒸发蒸干及冻干操作，形成冻干医用敷料。

在上述技术方案中，优选地，所述将所述质粒与感受态细菌悬液混匀并进行培养具体包括：将感受态细菌悬液加入离心管中，置于冰上；向所述离心管中加入所述质粒，并用移液器轻柔混匀，冰上静置20-30分钟；向所述离心管中加入LB液体培养基，混匀后在37℃环境下振荡培养；取所述离心管中的细菌培养液涂布至含有卡那霉素的LB固体培养基上；在37℃环境下倒置培养12-16小时，菌落生长良好而未互相重叠时取出；将所述菌落接种至LA液体培养基中，在37℃环境下以200rpm振摇培养；培养至OD600达到0.6-0.8时，加入IPTG进行诱导，并置于37℃摇床继续培养4小时。

在上述技术方案中，优选地，所述将经由IPTG诱导后的菌液进行发酵并洗脱得到所述目的蛋白具体包括：将诱导后的菌液加入含有卡那霉素的LB液体培养基中，在37℃环境下振荡培养，待LB液体培养基浑浊后倒入发酵罐中发酵12-24小时；取出发酵后的LB液体培养基装入离子交换柱，根据所述目的蛋白进行条件选择，洗脱得到所述目的蛋白。