[发明专利]一种用于制备生产EPA的小球藻发酵方法及EPA的提取方法

权利要求书

1.一种用于制备生产EPA的小球藻发酵方法，其特征在于，包括如下步骤：

S1.种子罐培养：将培养成熟的小球藻种子液按1％接种于种子罐中；其中：

种子罐培养基为：葡萄糖15g/L，低温豆粕粉3g/L，酵母蛋白胨20g/L，磷酸二氢钾2g/L，硫酸镁0.5g/L，维生素溶液1ml/L，人工海盐10g/L；

种子罐培养条件为：23-26℃，200-400rpm，通气量为0.5-0.8vvm，ph值自然，培养42-48hr；

菌体湿重达到100-150g/L时转种；

S2.发酵罐培养：将所述种子罐培养的小球藻种子液按15％转种于发酵罐中；其中：

发酵罐培养基为：葡萄糖80g/L，麦芽糖浆20g/L，低温豆粕粉12g/L，酵母蛋白胨4g/L，磷酸二氢钾3g/L，尿素1g/L，硫酸镁0.6g/L，维生素溶液2ml/L，人工海盐15g/L；

发酵罐培养条件为：23-26℃，100-150rpm，通气量为0.3-0.5vvm，以氨水控制ph＝6.5-6.8，培养至60hr流加麦芽糖浆50g/L，培养周期6-7d；

获得菌体湿重达到300-350g/L，EPA在干菌体的含量达到20-25％。

2.一种EPA的提取方法，其特征在于，包括如下步骤：

S1.发酵液的预处理：将放罐后的发酵液以微滤膜进行过滤，过滤过程中分批次加发酵液体积为2BV的纯化水，洗去料液中的水溶性杂质，水洗结束后浓缩至原发酵液体积1/2时结束过滤；其中，所述发酵液为如权利要求1所述的一种用于制备生产EPA的小球藻发酵方法中发酵形成的小球藻种子液的发酵液；

S2.预冷：将过滤后的浓缩发酵液转移至储罐中，以冷盐水降温至2-5℃；

S3.高压均质：将经预冷的发酵液转移至30MPa的高压均质机罐中，使小球藻菌体中的脂肪酸破壁分离；

S4.溶媒萃取：将破壁后的发酵液转移至萃取罐中，分别按发酵液体积的2BV、2BV、1BV加入正己烷萃取三次，合并有机相；

S5.浓缩：将萃取后的正己烷转移至浓缩罐，浓缩至无正己烷馏出，得EPA毛油；

S6.脱酸、脱水：将EPA毛油以10％氢氧化钠溶液调ph＝10±0.5，缓慢升温至60℃，保温2hr，然后静置沉降皂化粒；将弃去皂化粒的毛油加入10％的软化水洗涤三次，静置分层后弃去水相；水洗后的毛油在真空加热状态下浓缩出毛油残留的水分；

S7.脱色：将脱水后的毛油按3％加入食品级椰壳活性炭，升温至85℃脱色30min，以板框压滤机除去活性炭，降温至室温得成品EPA。