[发明专利]一种用于制备生产EPA的小球藻发酵方法及EPA的提取方法

说明书

本发明属于EPA制备技术领域，公开了一种用于制备生产EPA的小球藻发酵方法及EPA的提取方法，其中所述发酵方法包括：S1.种子罐培养：将培养成熟的小球藻种子液按1％接种于种子罐中，获得菌体湿重达到100‑150g/L时转种；S2.发酵罐培养：将所述种子罐培养的小球藻种子液按15％转种于发酵罐中，获得菌体湿重达到300‑350g/L，EPA在干菌体的含量达到20‑25％；所述提取方法包括：发酵液的预处理、预冷、高压均质、溶媒萃取，浓缩、脱酸脱水和脱色；其中，所述发酵液为所述发酵方法中所发酵的小球藻种子液的发酵液；综上，使得本发明具有发酵及提取工艺简单，产量高，成品质量好等优点。

技术领域

本发明属于EPA制备技术领域，具体涉及一种用于制备生产EPA的小球藻发酵方法及EPA的提取方法。

背景技术

EPA，又称二十碳五烯酸，是人体常用Ω-3脂肪酸之一，具有促进儿童大脑发育、抗炎、调节免疫力等功效。虽然人体可以通过亚麻酸转化为EPA，但其反应速度较慢且转化量较少，很难满足人体需求，因此仍需补充食物来源的EPA。

目前，食用的EPA主要来源于深海鱼类如野生鲑鱼，由于鱼类资源的减少及大量捕捞对生态平衡造成的影响，人们开始研究从其他途径获取EPA，生物发酵便是最佳的选择。能产生EPA的微生物主要为小球藻、拟球藻和高山背孢霉，其中高山背孢霉可实现异养发酵，但产量较低，毛油杂质含量高；而小球藻和拟球藻多以自养培育为主，占地面积较大，培养周期长且培养条件不易控制受季节影响较大，目前，在国内尚无关于EPA工业化生产的相关报道及产品。

发明内容

鉴于此，本发明的目的在于提供一种用于制备生产EPA的小球藻发酵方法及EPA的提取方法，通过对高产EPA小球藻的菌种选育及培养基的开发，实现了小球藻的异养发酵，并提取得到满足市场要求的EPA产品。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

一种用于制备生产EPA的小球藻发酵方法，包括如下步骤：

S1.种子罐培养：将培养成熟的小球藻种子液按1％接种于种子罐中；其中：

种子罐培养基为：葡萄糖15g/L，低温豆粕粉3g/L，酵母蛋白胨20g/L，磷酸二氢钾2g/L，硫酸镁0.5g/L，维生素溶液1ml/L，人工海盐10g/L；

种子罐培养条件为：23-26℃，200-400rpm，通气量为0.5-0.8vvm，ph 值自然，培养42-48hr；

菌体湿重达到100-150g/L时转种；

S2.发酵罐培养：将所述种子罐培养的小球藻种子液按15％转种于发酵罐中；其中：

发酵罐培养基为：葡萄糖80g/L，麦芽糖浆20g/L，低温豆粕粉12g/L，酵母蛋白胨4g/L，磷酸二氢钾3g/L，尿素1g/L，硫酸镁0.6g/L，维生素溶液2ml/L，人工海盐15g/L；

发酵罐培养条件为：23-26℃，100-150rpm，通气量为0.3-0.5vvm，以氨水控制ph＝6.5-6.8，培养至60hr流加麦芽糖浆50g/L，培养周期6-7d；

获得菌体湿重达到300-350g/L，EPA在干菌体的含量达到20-25％。

一种EPA的提取方法，包括如下步骤：

S1.发酵液的预处理：将放罐后的发酵液以微滤膜进行过滤，过滤过程中分批次加发酵液体积为2BV的纯化水，洗去料液中的水溶性杂质，水洗结束后浓缩至原发酵液体积1/2时结束过滤；其中，所述发酵液为上述公开的一种用于制备生产EPA的小球藻发酵方法中发酵形成的小球藻种子液的发酵液；

S2.预冷：将过滤后的浓缩发酵液转移至储罐中，以冷盐水降温至2-5℃；