[发明专利]一种用于排阻色谱法提取外泌体的出峰位置分子标记方法

说明书

本发明公开了一种用于排阻色谱法提取外泌体的出峰位置分子标记方法，包括：步骤1，配制蓝色葡聚糖溶液；步骤2，准备待分离的外泌体样品；步骤3，将配制好的蓝色葡聚糖溶液与待分离的外泌体样品进行均匀混合；步骤4，将混合后样品进行柱洗脱，从洗脱开始出现蓝色时进行外泌体收集直至蓝色消失为止，即可实现对外泌体的收集；所述蓝色葡聚糖为水溶性蓝色葡聚糖；所述蓝色葡聚糖溶液与待分离的外泌体样品是按照体积比为1:1进行混合的。本发明解决了在没有色谱仪的情况下可以用丙烯葡聚糖凝胶分离柱来准确洗脱收集外泌体。

技术领域

本发明涉及排阻色谱法提取外泌体技术领域，尤其涉及一种用于排阻色谱法提取外泌体的出峰位置分子标记方法。

背景技术

外泌体(Exosome)发现于1986年，是一种直径约30～100nm的双层膜囊泡状结构小体，可由机体内多种细胞如免疫细胞、干细胞、心血管细胞、网织红细胞、血小板、神经细胞和肿瘤细胞等主动分泌产生，广泛分布于外周血、尿液、唾液、乳汁、腹水、羊水等体液中。

外泌体携带大量特异性的蛋白质(如细胞因子、生长因子)以及功能性的mRNAs、miRNAs等生物活性物质，在体内参与细胞通讯、细胞迁移、促血管新生和抗肿瘤免疫等生理过程，与多种疾病的发生和进程密切相关。由于外泌体的特殊结构和功能，使得它具有潜在的应用价值，一方面可以作为诊断多种疾病的生物指标，另一方面也可以作为治疗手段，未来有可能作为药物的天然载体用于临床治疗。

外泌体的分离纯化一直是科研工作者关注的问题，获得高纯度的外泌体对后续的研究至关重要。据了解，目前人们多采用超速离心、免疫磁珠、超滤、沉淀或试剂盒等方法实现外泌体的提取分离。

近几年来，市场上已出现各种商业化的外泌体提取试剂盒，有的是通过特殊设计的过滤器过滤掉杂质成分，有的则采用空间排阻色谱法(SEC)进行分离纯化，也有的则利用化合物沉淀将法外泌体沉淀出来。这些试剂盒不需要特殊设备，随着产品不断更新换代，提取效率和纯化效果逐渐提高，因而逐渐取代超速离心法并推广开来。

其中排阻色谱法(SEC)是一种简单、温和、有效的去除样品来源中的小分子污染物的方法，得到了广泛的应用。

发明人发现，外泌体总是在选定的凝集基质柱的不同体积中被洗脱，但是不同长度、直径、基质成分或不同收集洗脱参数的分离柱可能导致结果差异和变化，使他们很难在已经发表的结果中进行联系和分析理解。因此，尚缺乏一种可靠、可重复性的SEC测定标准。

发明内容

为了解决上述相关领域中不足，本发明提供一种用于排阻色谱法提取外泌体的分子标记方法。

本发明的一种用于排阻色谱法提取外泌体的分子标记方法是通过以下技术方案实现的：

一种用于排阻色谱法提取外泌体的出峰位置分子标记方法，包括：

步骤1，配制蓝色葡聚糖溶液；

步骤2，准备待分离的外泌体样品；

步骤3，将配制好的蓝色葡聚糖溶液与待分离的外泌体样品进行均匀混合；

步骤4，将混合后样品进行柱洗脱，从洗脱开始出现蓝色时进行外泌体收集直至蓝色消失为止，即可实现对外泌体的收集。

进一步地，步骤1中所述蓝色葡聚糖为水溶性蓝色葡聚糖。

进一步地，所述蓝色葡聚糖溶液与待分离的外泌体样品是按照体积比为1:1进行混合的。

进一步地，所述蓝色葡聚糖溶液是通过用0.1mMPBS将水溶性蓝色葡聚糖配制成浓度为1mg/mL的溶液。

进一步地，所述待分离的外泌体样品包括血清样本和细胞培养上清。

进一步地，当所述待分离的外泌体样品为血清样本时，将所述血清标本与所述蓝色葡聚糖溶液按1:1的体积比混合。