[发明专利]两株基因组高度同源猪繁殖与呼吸综合征病毒强弱毒株感染性克隆构建、拯救与应用

权利要求书

1.两株基因组高度同源猪繁殖与呼吸综合征病毒强弱毒株感染性克隆构建，其特征是，提供了一种重组载体，包含HP-PRRSV基因组全长cDNA序列，该全长cDNA序列的5’端加有巨细胞病毒真核启动子序列，3’端Poly(A)尾下游加有丁肝炎病毒核酶序列以及牛生长激素多聚腺苷酸信号转录终止序列；

上述载体为pACYC177低拷贝载体，在pACYC177载体上插入四个单一限制性酶切位点PacI, AflII, AscI和NotI，用于HP-PRRSV强毒株XJ17-5和弱毒株JSTZ1712-12的感染性克隆构建。

2.如权利要求1所述的两株基因组高度同源猪繁殖与呼吸综合征病毒强弱毒株感染性克隆拯救，其特征是，将上述重组载体与高效转染试剂混合后直接转染Marc-145细胞或者转染BHK-21细胞后再感染Marc-145细胞，均拯救获得XJ17-5或者JSTZ1712-12感染性克隆病毒。

3.如权利要求1所述的两株基因组高度同源猪繁殖与呼吸综合征病毒强弱毒株的应用，其特征是，提供了一种人工构建的强弱毒株在研究HP-PRRSV体外复制效力差异上的应用:利用感染性克隆平台，通过在HP-PRRSV毒株非结构蛋白和结构蛋白编码基因之间引入特异性荧光标记，使其可应用于实时监测病毒复制过程；并借助感染性克隆平台进一步分析其复制力相关关键基因及位点。

4.如权利要求1所述的两株基因组高度同源猪繁殖与呼吸综合征病毒强弱毒株的应用，其特征是，提供了一种人工克隆的强弱毒株在研究HP-PRRSV毒力相关基因上的应用：利用感染性克隆平台，通过将HP-PRRSV强毒株与弱毒株进行相应基因片段互相替换，解析HP-PRRSV的毒力相关基因。

5.如权利要求1所述的两株基因组高度同源猪繁殖与呼吸综合征病毒强弱毒株的应用，其特征是，提供了一种人工改造的天然弱毒疫苗候选株，所述人工改造的天然弱毒疫苗候选株是HP-PRRSV天然弱毒株JSTZ1712-12的感染性克隆病毒，该人工改造天然弱毒疫苗候选株可应用于制备新型PRRSV基因工程疫苗。