[发明专利]一种犬细小病毒的检测引物、试剂盒及其使用方法

说明书

本发明涉及病毒检测技术领域，具体公开一种犬细小病毒的检测引物、试剂盒及其使用方法。所述检测引物的序列为：上游引物CPVF：5′‑TAGACCGTTACTGACATTCGC‑3′；下游引物CPVF：5′‑AATTCGAGTCTCTTTAACGTCTTCT‑3′。本发明提供的PCR检测引物，特异性较强，且灵敏度高，最低检测限可达5.47×10^‑2pg/μL，检测准确率为100％，且扩增序列的片段小，仅为610bp，整个PCR过程可以在2～2.5小时内完成，为犬细小病毒的早期检测和流行病学调查提供了可靠保障。

技术领域

本发明涉及病毒检测技术领域，尤其涉及一种犬细小病毒的检测引物、试剂盒及其使用方法。

背景技术

犬细小病毒(Canine Parvovirus，CPV)属细小病毒科，细小病毒属，单股线状DNA病毒。CPV主要感染犬类，尤其是幼犬，以导致发病率高、传染性强、死亡率高等特点成为犬科动物临床发病的重要致病病毒。不同年龄、性别、品种的犬均可感染。临床表现为呕吐、腹泻(或出血性腹泻)的患病犬中，CPV感染阳性犬可达29.8-46.2％，其中6月龄以下幼犬最为易感，占CPV感染犬总数的比例高达75％，是我国养犬业最为重要的传染病之一。随着我国工作犬(军犬、警犬、导盲犬等)、实验用犬和宠物犬饲养量的大幅增加，犬细小病毒感染日趋严重，不但影响着家养宠物的生命健康，还危害着我国养犬业、毛皮动物养殖业的发展，成为危害养犬业重大疫病之一。

临床上可根据血常规检测、试纸快速诊断法和发病的主要症状进行初步诊断，但是，这些方法均存在准确性低、特异性差和操作费时等缺陷。聚合酶链式反应(PolymeraseChain Reaction)，简称PCR，是一种分子生物学技术，用于扩增特定的DNA片段。随着PCR技术研究和应用的深化，该技术在兽医领域得到广泛应用。目前，用PCR法检测犬细小病毒感染的敏感性和特异性还有待进一步提高，目前市面上急需一种可以准确、更具有特异性、更灵敏地针对犬犬细小病毒进行检测的产品。

发明内容

针对现有检测犬细小病毒的PCR方法存在特异性差、灵敏度低的问题，本发明提供一种犬细小病毒的检测引物、试剂盒及其使用方法。

为达到上述发明目的，本发明实施例采用了如下的技术方案：

一种犬细小病毒的检测引物，所述检测引物的序列为：

上游引物CPVF：5′-TAGACCGTTACTGACATTCGC-3′；

下游引物CPVF：5′-AATTCGAGTCTCTTTAACGTCTTCT-3′。

相对于现有技术，本发明提供的PCR检测引物可以特异性结合到犬细小病毒的DNA上，用该检测引物对与患犬细小病毒症状相似的其他病毒(如)的基因组进行PCR扩增检测，该PCR检测引物只能以犬细小病毒的基因组DNA为模板得到扩增产物，其他类似病毒都无法得到扩增产物，这说明本发明提供的检测引物特异性高，且灵敏度高，最低检测限可达5.47×10^-2pg/μL，检测准确率为100％，且扩增序列的片段小，仅为610bp，整个PCR过程可以在1.5～2小时内完成，为犬细小病毒的早期检测和流行病学调查提供了可靠保障。

本发明还提供了一种检测犬细小病毒的试剂盒，包含上述检测引物。

优选的，还包括Tap酶、10×Taq酶反应缓冲液、dNTP和去离子水。

本发明还提供上述试剂盒的使用方法，具体操作为：提取待测病毒的基因组为模板，用所述试剂盒进行PCR扩增，将PCR扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳分析。

上述试剂盒的使用方法，耗时短、反应结果直观，可用于犬细小病毒的快速检测。