[发明专利]人COL1A1和/或COL1A2基因的扩增、检测突变用引物及其试剂盒

说明书

本发明提供了人COL1A1和/或COL1A2基因的扩增、检测突变位点用引物及其试剂盒，属于基因检测技术领域。检测人COL1A1和/或COL1A2基因DNA突变的试剂盒，包括用于检测COL1A1与COL1A2基因第1至第52外显子突变的测序引物组。采用特异性引物组，针对COL1A1和COL1A2基因的第1～52外显子进行突变检测，确保了测定结果的准确性与特异性，针对COL1A1与COL1A2基因突变所导致的成骨不全I‑IV型、爱莱尔‑当洛综合征、卡菲氏病、成骨不全与爱莱尔‑当洛综合征合并症等遗传性疾病进行基因检测，可用于COL1A1与COL1A2基因基因突变相关联的复杂疾病的基因检测。

技术领域

本发明属于基因检测技术领域，具体涉及人COL1A1和/或COL1A2基因的扩增、检测突变用引物及其试剂盒。

背景技术

胶原蛋白(Collagen)是一类重要的蛋白质。随着生物化学、分子生物学和细胞生物学技术的发展，目前已发现有27种不同类型的胶原，按照被发现的先后顺序分别称为I型胶原、II型胶原、III型胶原等。胶原通常由3条α-肽链组成，有些胶原分子的3条肽链是相同的，有些是不同的。按照国际惯例，胶原分子的3条肽链被称为α1-链、α2-链、α3-链。如果两种胶原相互叠加，那么在命名上附带上大写罗马数字，并用括号括起来，例如III型胶原的α1-链，称为α1(III)，α2-链称为α2(III)。

从功能方面分类，可以将胶原划分为两组，一组胶原是成纤维胶原，另一组是非成纤维胶原。I、II、III、IV、XXIV和XXVII型胶原都是成纤维胶原，其余的都是非成纤维胶原。然而非成纤维胶原也可以细分为6种：①FACIT(纤维结合的胶原，具有中断的三股螺旋)族胶原，包括IX、XII、XIV、XVI、XX和XXI；②网状结构胶原，包括IV、VIII和X型胶原；③念珠状原纤维胶原，VI型胶原即属于这一种；④锚定原纤维或纤丝胶原，包括VII和XVII型胶原；⑤跨膜区胶原，包括XIII、XXIII和XXV型胶原；⑥结构尚未明确的胶原，包括XV、XVIII、XXII和XXVI型胶原。

I型胶原蛋白由三条肽链组成，其中有两条α1-链，一条α2-链构成。在机体内分布广泛，是皮肤、骨骼、肌腱、角膜等重要组成成分。COL1A1与COL1A2基因分别编码前α1-链与前α2-链。COL1A1或COL1A2基因突变与诸多遗传性骨病相关，如成骨不全(osteogenesisimperfecta，OI)，爱莱尔-当洛综合征(Ehlers-Danlos syndrome，cvEDS)、卡菲氏病或婴儿骨皮质增生症(Caffey disease，infantile cortical hyperostosis，ICH))等。

成骨不全是一种胶原合成代谢障碍所导致的遗传性结缔组织罕见疾病。主要临床表型包括骨质疏松和骨的脆性增加、蓝巩膜、牙本质不全，早熟性耳硬化等症状。其中，I～IV型成骨不全是由于COL1A1或COL1A2基因突变所导致的常染色体显性遗传疾病。其中I型临床症状较轻，患者不骨折或有少数骨折史，肢体不变形。II型患者通常在围产期死亡，是最为严重的类型。III型患者因频繁骨折、肢体畸形、身材矮小。IV型为中等程度的成骨不全，介于I型与III型之间，骨折次数较少，通常不引起畸形。

心脏瓣膜型EDS(Cardiac-valvular type Ehlers-Danlos syndrome，cvEDS)具有心脏瓣膜缺损，关节活动过度、皮肤弹性强，薄弱，易形成疤痕，具有腹股沟疝，胸廓畸形，关节脱位及足部畸形等特征，该类型EDS主要是由于双等位COL1A2基因突变所致。关节松弛型EDS(The arthrochalasia type Ehlers-Danlos syndrome，aEDS)主要特征为髋脱位，关节松弛普遍，且多脱位或半脱位，皮肤易于拉伸。另外，组织脆性、易产生淤伤、肌肉张力降低、后凸畸形及骨量减少等也是该病的特征。OI/EDS疾病同时具有成骨不全以及爱菜尔-当洛综合征疾病的特征，突变多多发生在I型胶原蛋白氨基端与羧基端。