[发明专利]一种杀锥曲菌素的制备方法和应用

权利要求书

1.杀锥曲菌素在溶解藻细胞中的应用。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述藻细胞为海洋卡盾藻的细胞。

3.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于，以含有所述藻细胞的藻液的体积计，所述杀锥曲菌素的用量为不低于100μg/mL，所述藻液中藻细胞的浓度为1.0×10⁴～2.0×10⁴个/mL。

4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述杀锥曲菌素从曲霉属真菌Aspergillus sp.LW1的代谢产物中分离得到，其保藏编号为：CCTCC No.M2019453。

5.一种杀锥曲菌素的制备方法，其特征在于，包括：

将曲霉属真菌Aspergillus sp.LW1经发酵培养得到发酵培养物；

对所述发酵培养物依次进行粗提和分离纯化，得到杀锥曲菌素；

得到所述发酵培养物的步骤包括：

将曲霉属真菌Aspergillus sp.LW1接种到种子培养基中，于100-250rpm，20-30℃培养30-60h，得到种子液，其中，所述种子培养基的原料包括马铃薯、葡萄糖、海盐和去离子水，以1L种子培养基计，马铃薯为200g，葡萄糖为20g，海盐为30g，去离子水定容至1L；

将所述种子液加入到发酵培养基中，于20-30℃静置发酵10-35天，得到发酵培养物，其中，所述发酵培养基的原料包括大米、海盐和去离子水，以120mL去离子水计，大米为80g，海盐为3g；

所述粗提的步骤包括：

将所述发酵培养物用乙醇进行超声提取、过滤，得到乙醇提取物；

将所述乙醇提取物浓缩去除溶剂，得到乙醇浓缩物；

将所述乙醇浓缩物用去离子水溶解，用乙酸乙酯萃取，回收乙酸乙酯层，减压浓缩得到粗提品；

在得到乙醇提取物的步骤中，重复提取2-5次；

在得到乙醇浓缩物的步骤中，所述浓缩在45℃下进行；

在得到粗提品的步骤中，去离子水和乙酸乙酯的体积比为1：1，重复萃取2-5次；

所述分离纯化包括：

将粗提得到的粗提品依次进行正向硅胶柱层析分离和Sephadex LH-20层析分离，得到层析分离组分；

对所述层析分离组分进行正向HPLC分离纯化；

在所述正向硅胶柱层析分离的步骤中，包括：将所述粗提品用甲醇溶解后拌样，装柱，上样，用二氯甲烷进行洗脱，得到的洗脱液浓缩去除溶剂，得到二氯甲烷洗脱物；

在所述Sephadex LH-20层析分离的步骤中，包括：将所述二氯甲烷洗脱物用甲醇溶解后上样，依次用210mL、160mL、120mL洗脱体积的洗脱剂进行洗脱，并依次收集各洗脱体积所对应的洗脱液，取120mL洗脱体积对应的洗脱液作为层析分离组分，其中，所述洗脱剂选用体积比为1:1的氯仿和甲醇；

在所述正向HPLC分离纯化的步骤中，色谱柱为：Zorbax Rx-SIL正相色谱柱(250mm×4.6mm，5μm)，流动相为：体积比15:85的乙醇和环己烷，洗脱方式为：等度洗脱，收集保留时间8min的组分，即得杀锥曲菌素。