[发明专利]一种水中13种大环内酯类抗生素的高分辨质谱检测方法

说明书

本发明属于抗生素检测领域，公开了一种水中13种大环内酯类抗生素的高分辨质谱检测方法。本发明所述方法为：量取水样，用氨水调节pH=7~10，加入Na2EDTA、异丙醇，混匀，C18固相萃取膜依次用甲醇、水预处理，水样以45‑55 mL/min流速过膜，水淋洗固相萃取膜，去除残留水分，甲醇洗脱，洗脱液吹干，加入甲醇，旋涡混合溶解残渣，经滤膜过滤后，用液相色谱‑四极杆‑静电轨道阱高分辨质谱进行测定。该方法无需建立谱库，按照设定条件一次进样获得定性与定量结果，此外，采用固相萃取膜进行样品富集，缩短了样品处理时间，提高了检测效率。

技术领域

本发明涉及抗生素检测领域，具体是涉及一种水中13种大环内酯类抗生素的高分辨质谱检测方法。

背景技术

大环内酯类抗生素是结构中含有内酯环及脱氧糖的一类弱碱性抗生素，常用的包括有14环的红霉素（ERY）、罗红霉素（ROM）、地红霉素（DRM）、氟红霉素（FRM）、克拉霉素（CLM）、竹桃霉素（OLM），15元环的阿奇霉素（AZM），16元环的泰乐霉素（TLS）、螺旋霉素（SPM）、吉他霉素（KTM）、米卡霉素(MDM)、替米考星（TMC）、交沙霉素（JSM）等。大环内酯类抗生素除用于治疗人类细菌感染，在畜禽水产养殖中也被广泛用于疾病治疗、提高饲料利用率和促进动物生长。这些抗生素并不能被动物体完全吸收，很大一部分最终以原形或者代谢物的形式排入环境中。环境中痕量的抗生素残留就能诱导细菌产生抗性基因，获得耐药性，并藉由横向传递作用转移到病原菌中或通过食物链转移到人或其他动物体内。

目前，致病菌耐药性的增加和扩散已经成为全球公共安全问题。但是水体环境中抗生素含量为痕量级别，需要富集后才能进入仪器检测。当前环境中抗生素检测主要使用固相萃取柱富集，这种方法的流速对回收率影响较大，且富集500mL样品需要1小时以上，难以应对大量样品检测。

发明内容

本发明为了克服上述背景技术的不足，提供了一种水中13种大环内酯类抗生素的高分辨质谱检测方法。本发明提供的方法是一种基于固相萃取膜技术，建立的液相色谱-四极杆/静电场离子轨道阱质谱检测海水中大环内酯类抗生素的方法，对了解水体环境中抗生素残留重要参考意义。

其中，固相萃取膜由于比表面积大，500mL样品10min内可以完成富集，极大提高了样品处理效率。四极杆/静电场离子轨道阱质谱具有获取一、二级碎片离子精确质量数的功能，对一级全扫描谱图提取精确质量数可获得提取离子流图，从而实现高通量的目标物定量及非目标物的筛查，在一级全扫描的同时可以获得二级碎片离子质谱图，得到高可靠性的确证结果。

为达到本发明的目的，本发明水中13种大环内酯类抗生素的高分辨质谱检测方法为：量取水样，用氨水调节pH=7~10，加入Na₂EDTA、异丙醇，混匀，C18固相萃取膜依次用甲醇、水预处理，水样以45-55 mL/min流速过膜，水淋洗固相萃取膜，去除残留水分，甲醇洗脱，洗脱液吹干，加入甲醇，旋涡混合溶解残渣，经滤膜过滤后，用液相色谱-四极杆-静电轨道阱高分辨质谱进行测定；其中，所述13种大环内酯类抗生素为红霉素、罗红霉素、地红霉素、氟红霉、克拉霉素、竹桃霉素、阿奇霉素、螺旋霉素、泰乐霉素、吉他霉素、麦迪霉素、交沙霉素、替米考星。

优选地，本发明水中13种大环内酯类抗生素的高分辨质谱检测方法为：量取500mL水样，用氨水调节pH=7~10，加入0.2g Na₂EDTA，5 mL异丙醇，混匀，C18固相萃取膜依次用5 mL甲醇、5 mL水预处理，水样以50 mL/min流速过膜，10mL水淋洗固相萃取膜，减压抽干去除残留水分，10 mL甲醇洗脱，洗脱液在40 ℃下氮吹至干，加入1 mL 20 %甲醇，旋涡混合溶解残渣，经0.22 μm滤膜过滤后，用液相色谱-四极杆-静电轨道阱高分辨质谱进行测定。

进一步优选地，所述水样用氨水调节pH=9.5~10.5。