[发明专利]一种废水的发育神经毒性评估方法

说明书

本发明公开了一种废水的发育神经毒性评估方法，将huc：eGFP转基因斑马鱼胚胎暴露于待检测的废水中至24hpf，将暴露后的胚胎取出后，于荧光倒置显微镜下观察，并采集图像进行分析。与现有技术相比，本发明基于转基因斑马鱼的评估手段，借助生物显微技术，即绿色荧光(GFP)易于检测的特性，实现了废水发育神经毒性的直接可视化及半定量检测。本发明不仅适用于废水发育神经毒性评估，也适用于化学品及其他众多环境水体的毒性评估。且其具有操作简单、快速高效等优势。

技术领域

本发明属于水质评估领域，具体涉及一种废水的发育神经毒性评估方法。

背景技术

目前对废水的监控仍以化学分析法为主。从简单的总有机碳(TOC)、总磷(TP)、总氮(TN)测定等到复杂的色谱、质谱及色谱-质谱连用技术均只能大致了解污染物的浓度信息，并且往往需要昂贵的化学药品和设备，同时分析过程中也容易引入二次污染^[1]。更重要是这种纯粹的化学方法无法提供有关暴露时间变化或污染物相互作用所引起的生物毒性危害信息^[2]。因而生物毒性测试被越来越多的应用于废水水质评估及生态风险评估中。

由于生物在遭受废水暴露时表现出物种、器官及生物系统敏感性差异巨大，生物毒性测试也成为了一个具有多物种、多毒性终点及多检测手段等特点的复杂评估体系。发育神经毒性则其中是一个与物种繁殖高度相关的毒性终点，决定着后代生物的生存能力。而目前废水的发育神经毒性却受到较少关注。

现有发育神经毒性的检测方法主要由运动行为分析、免疫组织化学、酶联免疫反应(ELISA)或是其他分子生物学手段。廖等人借助运动检测仪器记录并分析了氯胺酮和甲基苯丙胺对斑马鱼的运动行为特征以此评估其发育神经毒性^[3]。此类方法评估的终点过于末端，敏感性较差，实验过程复杂，需配备专门仪器。乙酰胆碱酯酶(AChE)是另一个常用来反应污染物神经毒性的生物标志物。毛等人在评价邻苯二甲酸二正丁酯和铅的联合暴露对幼鼠的神经发育毒性研究中采用ELISA测定了AChE水平^[4]。该类方法所使用生物检测试剂盒价格较为高昂。同样的免疫组织化学及分子生物学手段也往往花费较高，实验操作复杂。尤其是应用于废水发育神经毒性评估中时，较高的价格往往意味着难以普及，而复杂的实验操作意味着更大的劳动投入。因此开发一种操作简单，成本低廉并且快速高效的废水发育毒性评估十分必要。

参考文献

[1]Park,J.；Brown,M.T.；Depuydt,S.；Kim,J.K.；Won,D.S.；Han,T.,Comparingthe acute sensitivity of growth and photosynthetic endpoints in three Lemnaspecies exposed to four herbicides.Environmental Pollution 2017,220,818-827.

[2]Lee,H.；Park,J.；Shin,K.；Depuydt,S.；Choi,S.；De Saeger,J.；Han,T.J.,Application of a programmed semi-automated Ulva pertusa bioassay for testingsingle toxicants and stream water quality.Aquatic Toxicology 2020,221.

[3]Liao,P.H.；Hwang,C.C.；Chen,T.H.；Chen,P.J.,Developmental exposuresto waterborne abused drugs alter physiological function and larval locomotionin early life stages of medaka fish.Aquatic Toxicology 2015,165,84-92.