[发明专利]松果体损伤大鼠模型的构建方法

权利要求书

1.一种松果体损伤大鼠模型的构建方法，其特征在于：大鼠腹腔注射PCPA 450 mg·kg^-1，连续注射2d，每天1次；

或大鼠使用穿梭箱给电刺激，电刺激电压30 V、电流0.8 A、刺激30 s、间隔30 s、循环60次，连续5 d；

或电刺激大鼠第四天加用PCPA，电刺激条件为：电压30 V、电流0.8 A、刺激30 s、间隔30 s、循环60次，连续5天，第4天腹腔注射PCPA 450 mg·kg^-1，连续注射2d，每天1次；

具体步骤如下：

（1）建模：大鼠适应性喂养1周后开始建模，建模方法采用PCPA腹腔注射，或电刺激，或PCPA腹腔注射联合电刺激法；

其中：PCPA腹腔注射为建模开始起第4天，腹腔注射PCPA混悬液10 ml·kg^-1，连续注射两天，每天1次；

电刺激为：模型制备第一天置穿梭箱给予电刺激，电刺激方法为：电压30V、电流0.8 A、刺激时间30 s、间隔时间30 s、循环60次，每天同一时间连续电刺激5日；

PCPA腹腔注射联合电刺激法为：模型制备第一天置穿梭箱给予电刺激，电刺激方法为：电压30V、电流0.8 A、刺激时间30 s、间隔时间30 s、循环60次，每天同一时间连续电刺激5日；同时，建模开始起第4天，腹腔注射PCPA混悬液10 ml·kg^-1，连续注射两天，每天一次；

所述PCPA混悬液为：称取无水碳酸钠3.392 g、碳酸氢钠1.512 g，加蒸馏水500 mL，搅拌均匀，混合，配制成pH10.1的0.1mol/L碳酸盐缓冲液，将PCPA溶于上述碳酸盐缓冲液中，PCPA在碳酸盐缓冲液中的浓度为45 g·L^-1，80℃加热30 min，功率250W，频率40kHz超声处理5 min，临用现配；

（2）对造模动物进行指标检测：对造模动物进行行为学及药理学相关指征检测，并取血检测相关血清学指标，以及松果体病理组织形态学指标，综合筛选出判定松果体损伤大鼠模型的模型；

所述行为学及药理学相关指征检测为：旷场活动测试、高架十字迷宫测试；所述相关血清学指标为：血清MT及5-HT、GABA神经递质含量。

2.根据权利要求1所述的一种松果体损伤大鼠模型的构建方法，其特征在于：所述步骤（2）中得到的松果体损伤大鼠模型中，与正常对照组相比，具有下列特征：

（1）一般情况：正常大鼠昼夜节律及行为活动正常，皮毛柔顺；造模后大鼠白天夜晚活动不停，易惊吓，互相打斗，皮毛战栗；头部震颤，放置穿梭箱时有对抗行为，对穿梭箱有抵抗；

（2）旷场活动测试：造模后，大鼠的旷场活动总距离、平均速度均显著降低；旷场活动中央区时间：PCPA处理、PCPA联合电刺激组显著提高；电刺激组无统计学意义；表明模型组大鼠虽然活动总距离少但性情急躁速度较快，而且用PCPA造模大鼠对明暗无明显嗜好喜好乱窜；

（3）高架十字迷宫：进入开放臂次数百分比PCPA联合电刺激组显著增高，PCPA及电刺激组有增高趋势；开放臂时间百分比PCPA组、PCPA联合电刺激组显著提高，电刺激有增加趋势，表明模型大鼠没有表现出害怕逃避高空开放环境喜欢躲避至暗环境的焦虑状态，反而都有些好动狂躁现象；

（4）血清MT含量：PCPA组、电刺激组PCPA联合电刺激组均显著降低；表明此模型主要对松果体损伤后分泌的MT有显著影响作用；

（6）松果体病理组织学变化：正常大鼠松果体细胞和梭形胶质细胞排列紧密，均匀分布，清晰可见；三种造模大鼠：松果体细胞排列紊乱，细胞数目减少，空泡变性增多，细胞核固缩向周边移动，细胞界限模糊。

3.根据权利要求1所述的一种松果体损伤大鼠模型的构建方法，其特征在于：所述大鼠为SD大鼠，饲养条件：温度：20℃～23℃，湿度：20%～50%。