[发明专利]松果体损伤大鼠模型的构建方法

说明书

本发明属实验动物模型技术领域，为解决目前松果体损伤模型操作复杂、成功率低、造模时间长、可重复性低等问题，提供一种松果体损伤大鼠模型的构建方法。大鼠腹腔注射PCPA 450 mg/kg，连续注射2d，每天1次；或大鼠用穿梭箱给电刺激，电刺激电压30 V、电流0.8 A、刺激30 s、间隔30 s、循环60次，连续5d；或电刺激法大鼠第四天加用腹腔注射PCPA法。病理组织形态学、血清检测松果体主要合成分泌激素褪黑素含量，动物一般情况及行为学辅助方法客观评价三种造模方法，均造成大鼠松果体的损伤，为研究筛选对松果体损伤具有保护治疗作用的药物及机制提供良好的模型依据；方法简便、成模时间短、重复性好、指标评价简单可靠。

技术领域

本发明属于实验动物模型技术领域，具体涉及一种松果体损伤大鼠模型的构建方法。

背景技术

松果体（pineal gland）是机体生物钟节律的重要组成部分[1]，是维持内源性生物钟运作的核心元件，其合成分泌的褪黑素（melatonin，MT），具有促进睡眠、调节时差、抗衰老、调节免疫、抗肿瘤等多种作用，因其可促进睡眠，被称为“生理性催眠剂”[2]。松果体随着年龄增长松果体细胞变大，有空泡改变，合成分泌褪黑素下降，其调节昼夜节律作用减退。目前松果体损伤模型有通过分离左颈总动脉且永久性结扎，造新生儿大鼠缺氧缺血性脑病模型，研究松果体对机体昼夜节律影响[3]，手术操作复杂，成功率低；D-半乳糖致衰老大鼠松果体过氧化损伤模型，造模时间长[4]。

对氯苯丙氨酸（dl-4-chlorophenylalanine,PCPA）腹腔注射是目前公认的经典失眠动物模型，PCPA通过抑制色氨酸氨化酶合成，从而减少5-羟色胺（5-hydroxytryptamine,5-HT）的生成，睡眠-觉醒周期紊乱，且其操作较简单、具有良好的可重复性[5]，但目前未曾报道有直接导致松果体的损伤；电刺激应激模型可使昼夜节律紊乱且操作简单、可重复性强[6]。

发明内容

本发明为了解决目前松果体损伤模型操作复杂、造模时间长、成功率低、可重复性较差等问题，提供了一种松果体损伤大鼠模型的构建方法，并筛选出评价模型的几个经典指标。

本发明由如下技术方案实现的：一种松果体损伤大鼠模型的构建方法，大鼠腹腔注射PCPA 450 mg·kg^-1，连续注射2d，每天1次；

或大鼠使用穿梭箱给电刺激，电刺激电压30 V、电流0.8 A、刺激30 s、间隔30 s、循环60次，连续5 d；

或电刺激大鼠第四天加用PCPA，电刺激条件为：电压30 V、电流0.8 A、刺激30 s、间隔30 s、循环60次，连续5天，第4天腹腔注射PCPA 450 mg·kg^-1，连续注射2d，每天1次。

具体步骤如下：

（1）建模：大鼠适应性喂养1周后开始建模，建模方法采用PCPA腹腔注射，或电刺激，或PCPA腹腔注射联合电刺激法；

其中：PCPA腹腔注射PCPA混悬液10 ml·kg^-1，连续注射2d，每天1次；

电刺激为：模型制备第一天置穿梭箱给予电刺激，电刺激方法为：电压30V、电流0.8 A、刺激时间30 s、间隔时间30 s、循环60次，每天同一时间连续电刺激5日；

PCPA腹腔注射联合电刺激法为：模型制备第一天置穿梭箱给予电刺激，电刺激方法为：电压30V、电流0.8 A、刺激时间30 s、间隔时间30 s、循环60次，每天同一时间连续电刺激5 d；同时，建模开始起第四天，腹腔注射PCPA混悬液10 ml·kg^-1，连续注射2d，每天1次；