[发明专利]同时检测4种A组柯萨奇病毒亚型的核酸组合物及其试剂盒和检测方法

权利要求书

1.一种同时检测4种A组柯萨奇病毒亚型的核酸组合物，其特征在于：包括以下引物和探针序列：

CA2上游引物序列SEQ ID No：1；

CA2下游引物序列SEQ ID No：2；

CA2探针序列SEQ ID No：3；

CA4上游引物序列SEQ ID No：4；

CA4下游引物序列SEQ ID No：5；

CA4探针序列SEQ ID No：6；

CA5上游引物序列SEQ ID No：7；

CA5下游引物序列SEQ ID No：8；

CA5探针序列SEQ ID No：9；

CA8上游引物序列SEQ ID No：10；

CA8下游引物序列SEQ ID No：11；

CA8探针序列SEQ ID No：12。

2.一种同时检测4种A组柯萨奇病毒亚型的试剂盒，其特征在于：包括权利要求1所述的核酸组合物、dNTP、RT-PCR buffer、酶液和ddH₂O。

3.根据权利要求2所述的同时检测4种A组柯萨奇病毒亚型的试剂盒，其特征在于：所述RT-PCR buffer为10×RT-PCR buffer，包含400mM tris-base、0.5% TritonX-100、80mMMgCl₂和5%甘油。

4.根据权利要求2所述的同时检测4种A组柯萨奇病毒亚型的试剂盒，其特征在于：所述酶液包含逆转录酶M-MLV、热启动化学修饰Taq DNA聚合酶、RNA酶抑制剂和Taq酶稀释液。

5.根据权利要求4所述的同时检测4种A组柯萨奇病毒亚型的试剂盒，其特征在于：所述逆转录酶M-MLV、热启动化学修饰Taq DNA聚合酶、RNA酶抑制剂和Taq酶稀释液混合的体积比为1：3：2：4。

6.一种同时检测4种A组柯萨奇病毒亚型的方法，其特征在于：采用荧光探针RT-PCR法，荧光定量PCR扩增反应体系为：

2.5mM/mL dNTP 1-2μL；

10×RT-PCR buffer 2.5μL；

50pmol/μL权利要求1 CA2上游引物 0.1-0.2μL；

50pmol/μL权利要求1 CA2下游引物 0.1-0.2μL；

50pmol/μL权利要求1 CA4上游引物 0.1-0.2μL；

50pmol/μL权利要求1 CA4下游引物 0.1-0.2μL；

50pmol/μL权利要求1 CA5上游引物 0.1-0.2μL；

50pmol/μL权利要求1 CA5下游引物 0.1-0.2μL；

50pmol/μL权利要求1 CA8上游引物 0.1-0.2μL；

50pmol/μL权利要求1 CA8下游引物 0.1-0.2μL；

50pmol/μL权利要求1 CA2探针 0.03-0.08μL；

50pmol/μL权利要求1 CA4探针 0.1-0.15μL；

50pmol/μL权利要求1 CA5探针 0.05-0.1μL；

50pmol/μL权利要求1 CA8探针 0.1-0.15μL；

酶液 1-2μL；

核酸模板 0.5~5μL；

ddH₂O 补至25μL。