[发明专利]同时检测4种A组柯萨奇病毒亚型的核酸组合物及其试剂盒和检测方法

说明书

本发明公开了同时检测4种A组柯萨奇病毒亚型的核酸组合物及其试剂盒和检测方法，属于体外分子检测领域。所述核酸组合物包括以下序列：CA2F:SEQ ID No：1；CA2R:SEQ ID No：2；CA2P:SEQ ID No：3；CA4F:SEQ ID No：4；CA4R:SEQ ID No：5；CA4P:SEQ ID No：6；CA5F:SEQ ID No：7；CA5R:SEQ ID No：8；CA5P:SEQ ID No：9；CA8F:SEQ ID No：10；CA8R:SEQ ID No：11；CA8P:SEQ ID No：12。本发明能够快速准确的对柯萨奇病毒四种亚型进行筛查，特异性好。

技术领域

本发明涉及体外分子检测技术领域，特别涉及一种同时检测4种A组柯萨奇病毒亚型的核酸组合物及其试剂盒和检测方法。

背景技术

柯萨奇病毒(coxsachie virus)是一种肠病毒，分为A和B两型，其中A型包含24种亚型，B型包含5种不同亚型。柯萨奇病毒A型感染表现为上呼吸道感染起病急，流涕、咳嗽、咽痛、发热，全身不适；柯萨奇病毒B型感染引起特征性传染性胸肋痛，可合并脑膜脑炎、心肌炎、发热、肝炎、溶血性贫血和肺炎。

目前对于体外病毒RNA的核酸检测方法主要包括一步法RT-PCR法，荧光染料RT-PCR法和荧光探针RT-PCR法。其中一步法RT-PCR法由于需要进行开盖电泳，容易导致实验室污染，不宜大范围使用；而荧光染料RT-PCR法由于其荧光显色原理导致其易出现假阳性结果，因此也不适合临床检测。荧光探针RT-PCR法由于其特异性高、灵敏度高等优势，目前是国内外应用最为广泛的技术方法之一。该方法的原理主要基于标记不同颜色Taq-Man荧光探针，结合相关荧光检测系统仪器，达到检测的目的。

现有的检测柯萨奇病毒相关的试剂盒大多采用单重或双重荧光探针方法实现对柯萨奇不同亚型的快速诊断，但是由于柯萨奇病毒亚型多，无法达到快速对柯萨奇病毒众多亚型进行分型检测的目的。另外，现有的柯萨奇病毒检测试剂盒大多针对CA16或CA10，很少有针对A2、A4、A5或A8型的柯萨奇病毒，给A2、A4、A5或A8型柯萨奇病毒的检测带来困难。

发明内容

针对现有技术存在的不足，本发明的目的是提供一种同时检测4种A组柯萨奇病毒亚型的核酸组合物及其试剂盒和检测方法，本发明能够在一管反应中同时检测A2 型，A4型，A5型和A8型的靶基因，通量高，检测速度快。

本发明的上述技术目的是通过以下技术方案得以实现的：

一种同时检测4种A组柯萨奇病毒亚型的核酸组合物，包括以下引物和探针序列：

CA2上游引物 ACAAGGATTCTTACGCAGCTTCGGCAG SEQ ID No：1

CA2下游引物 GCAGAGCGTCCAATACAG SEQ ID No：2

CA2探针 ACAAGGATTCTTACGCAGCTTCGGCAG SEQ ID No：3

CA4上游引物 AGTCCACCACCACAAGTG SEQ ID No：4

CA4下游引物 GACACTGCCCGTAGGATAG SEQ ID No：5

CA4探针 ATGTCACCAGCCAGTGCCTATCAGTGG SEQ ID No：6

CA5上游引物 GTGAGCAACAGAGCGATTG SEQ ID No：7

CA5下游引物 GTGGAGTTACCGACAGTGA SEQ ID No：8