[发明专利]一种鱼类高脂存储肝细胞分离和培养方法有效
| 申请号： | 202010590409.9 | 申请日： | 2020-06-24 |
| 公开（公告）号： | CN111849862B | 公开（公告）日： | 2022-06-07 |
| 发明（设计）人： | 苗宗余;蔡磊;黄韧;李建军;魏远征;叶惠欣;曾进 | 申请（专利权）人： | 广东省实验动物监测所 |
| 主分类号： | C12N5/071 | 分类号： | C12N5/071 |
| 代理公司： | 广州科粤专利商标代理有限公司 44001 | 代理人： | 刘明星;朱聪聪 |
| 地址： | 510663 广东*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 鱼类 存储 肝细胞 分离 培养 方法 | ||
1.一种鱼类高脂存储肝细胞分离和培养方法，其特征在于，包括以下步骤：
a、选取45-55d虾虎鱼幼鱼，在无菌条件下获得其肝脏组织，将肝脏组织分散成块，获得组织块；
b、将孔径20μm的细胞筛置于胰蛋白酶终止液中，在孔径20μm的细胞筛上方设置有孔径50μm的细胞筛；
c、将组织块置于孔径50μm的细胞筛中，持续添加胰蛋白酶液于孔径50μm的细胞筛中消化组织块，流动持续消化，收集位于孔径20μm的细胞筛上的细胞，用含10％FBS的培养基清洗，获得高脂存储肝细胞；
d、将高脂存储肝细胞接种到培养基中培养。
2.根据权利要求1所述的鱼类高脂存储肝细胞分离和培养方法，其特征在于，所述的将高脂存储肝细胞接种到培养基中培养是将高脂存储肝细胞接种到无血清M199培养基中，于27±1℃，5％CO2条件下培养，隔天更换培养液。
3.根据权利要求1或2所述的鱼类高脂存储肝细胞分离和培养方法，其特征在于，所述的将肝脏组织分散成块，获得组织块，组织块大小为1±0.1mm2小块。
4.根据权利要求1或2所述的鱼类高脂存储肝细胞分离和培养方法，其特征在于，所述的胰蛋白酶终止液是含有10％FBS的M199培养基。
5.根据权利要求1或2所述的鱼类高脂存储肝细胞分离和培养方法，其特征在于，所述的胰蛋白酶液是含质量分数0.25％的胰蛋白酶液。
6.根据权利要求1或2所述的鱼类高脂存储肝细胞分离和培养方法，其特征在于，所述的流动持续消化是流动持续消化，直到组织块消失。
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