[发明专利]一种重组犬细小病毒单克隆抗体生产方法

权利要求书

1.一种重组犬细小病毒单克隆抗体生产方法，其特征在于：该方法步骤如下：

S1、培养基配制：选择重组瘤细胞型培养基作为主成分，并准备Tris-HCL缓冲液、乙酸和10％血清浓度的胎牛血清，控制培养基处于pH5.2-6.4的弱酸性状态下；

S2、瘤细胞驯化：将重组处理的SP2/0细胞复苏后接种于S1的培养基中，置于37.2-37.8℃，6-12％二氧化碳的培养箱中，每36-44h进行传代培养，观察细胞增殖的程度，依次降低培养基中1-2％的血清浓度，直至血清浓度递减到3％，获得驯化培养完成的重组瘤细胞；

S3、流加培养：选择S2中驯化完成的重组瘤细胞培养液，进行离心处理并祛除其上清成分，然后转移至培养器中，在每54h内对培养器进行批次补料流加操作，且进一步降低其中的血清浓度至1.5％的水平，控制单次补料流加的培养基占培养器中总体积的5-8％；

S4、抗体纯化：在对S3中的培养器进行4-5轮的流加培养后，将其加入到洗液瓶中，添加盐酸缓冲液调节其中的pH值在3.6-4.4范围内，然后加入1.1-1.6％的生理盐水，与其中的蛋白质成分反应析出浑浊物，经离心后取其上清成分获得抗体；

补料流加的培养基为SP2/0细胞灌注用培养基，包括以下组分：

1640型培养基40-55份；

CHO型培养基60-70份；

盐酸缓冲液10-15份；

生理盐水120-150份；

胎牛血清20-25份；

蒸馏水50-65份；

其中，S3中所述的培养器包括反应罐(1)、补充罐(2)和控制器；所述反应罐(1)中培养有重组瘤细胞，反应罐(1)上设置有补料管(11)和排渣管(12)；所述补料管(11)与反应罐(1)的侧壁相切，补料管(11)的末端设有补充罐(2)，补料管(11)与补充罐(2)相连通；所述反应罐(1)的内壁上设置有螺旋的凹槽(13)，凹槽(13)的顶端与补料管(11)的端口相连通；所述补充罐(2)的下方设有支腿(3)，补充罐(2)与支腿(3)之间设有转座(4)；所述转座(4)中设置有伺服电机(41)，伺服电机(41)驱动补充罐(2)在支腿(3)上转动起来；所述控制器用于记录培养的时间和控制伺服电机(41)的运行；

所述补充罐(2)上设有槽环(21)，槽环(21)转动安装在补充罐(2)的外壁上；所述槽环(21)的内侧与补充罐(2)相连通，槽环(21)的外侧连通有固定的补料管(11)；

所述槽环(21)中设置有滑动的槽盘(22)，槽盘(22)垂直于槽环(21)的内壁；所述槽盘(22)安装在补充罐(2)的侧壁上，槽盘(22)随补充罐(2)的转动在槽环(21)中扫掠而过。

2.根据权利要求1所述的一种重组犬细小病毒单克隆抗体生产方法，其特征在于：所述排渣管(12)的端口上设置有隔膜(121)，隔膜(121)使反应罐(1)中的培养液与外部的气压维持平衡；所述隔膜(121)在流加培养基的增量作用力下形变开启排渣管(12)，隔膜(121)在排出相应量的培养基后形变恢复使排渣管(12)的闭合起来。

3.根据权利要求2所述的一种重组犬细小病毒单克隆抗体生产方法，其特征在于：所述排渣管(12)的中心设有轴杆(5)，轴杆(5)上设置有浆轮(51)，轴杆(5)的顶部贯穿隔膜(121)伸入至反应罐(1)内；所述轴杆(5)的顶端设置有扣盖(52)，轴杆(5)通过扣盖(52)转动安装在排渣管(12)中；所述扣盖(52)的侧壁上设置有环绕的排渣口(53)，扣盖(52)的周向上设置有伸出的拨条(54)，拨条(54)与反应罐(1)的底面滑动接触。