[发明专利]一种去除重组白介素-2内毒素的方法在审
申请号: | 202010592544.7 | 申请日: | 2020-06-24 |
公开(公告)号: | CN111793124A | 公开(公告)日: | 2020-10-20 |
发明(设计)人: | 朱文瑾;李浛民;陈平 | 申请(专利权)人: | 宁波博睿瀚达生物科技有限公司 |
主分类号: | C07K14/55 | 分类号: | C07K14/55;C07K1/18 |
代理公司: | 宁波市鄞州盛飞专利代理事务所(特殊普通合伙) 33243 | 代理人: | 邢丽艳;洪珊珊 |
地址: | 315194 浙江省宁波市*** | 国省代码: | 浙江;33 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 去除 重组 白介素 内毒素 方法 | ||
1.一种去除重组白介素-2内毒素的方法,其特征在于,所述去除重组白介素-2内毒素的方法包括如下步骤:
S1、在重组白介素-2样品Ⅰ中添加阴离子助溶剂十二烷基硫酸钠(SDS),混匀后调节pH至7.0~7.5,形成重组白介素-2样品Ⅱ;
S2、在重组白介素-2样品Ⅱ中加入氯化钠至其浓度为0.8~1.2mol/L,形成重组白介素-2样品Ⅲ,将所述重组白介素-2样品Ⅲ通过弱阴离子高效液相色谱柱进行动态吸附;
S3、采用平衡液对弱阴离子高效液相色谱柱进行第一次洗脱,所述平衡液中含有浓度为0.8~1.2mol/L的氯化钠,然后采用洗脱液进行第二次洗脱,收集第二次洗脱的洗脱液。
2.根据权利要求1所述去除重组白介素-2内毒素的方法,其特征在于,所述去除重组白介素-2内毒素的方法还包括采用大肠杆菌生产重组白介素-2发酵液的预备步骤,以形成重组白介素-2样品Ⅰ。
3.根据权利要求1所述去除重组白介素-2内毒素的方法,其特征在于,步骤S1所述阴离子助溶剂的加入量为重组白介素-2样品Ⅰ的0.03~0.07wt%。
4.根据权利要求1所述去除重组白介素-2内毒素的方法,其特征在于,步骤S2所述阴离子高效液相色谱柱采用DEAE阴离子交换填料。
5.根据权利要求4所述去除重组白介素-2内毒素的方法,其特征在于,步骤S2所述DEAE阴离子交换填料的粒度为4~6μm。
6.根据权利要求1所述去除重组白介素-2内毒素的方法,其特征在于,步骤S3所述平衡液包括的组分及其含量如下,
Tris-HCl缓冲液:8~12mmol/L,PH为7.0~7.5,
NaCl:0.8~1.2mol/L。
7.根据权利要求1所述去除重组白介素-2内毒素的方法,其特征在于,步骤S3所述洗脱液为Tris-HCL缓冲液,PH为7.0~7.5。
8.根据权利要求1所述去除重组白介素-2内毒素的方法,其特征在于,所述去除重组白介素-2内毒素的方法还包括柱再生的步骤,具体为在所述第二次洗脱之后依次用40~60℃纯净水、1.4~1.6mol/L NaCl溶液对色谱柱进行清洗。
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