[发明专利]一种猕猴桃离体资源的嫁接保存方法

权利要求书

1.一种猕猴桃离体资源的嫁接保存方法，其特征在于包括下列步骤：

A、接穗离体无菌材料的获得：取待保存繁育的猕猴桃资源硬枝于室内水培，硬枝切取成长20-30cm的截段，硬枝形态学上端切口用石蜡密封，形态学下端5-8cm浸泡于装有含0.1-0.2%多菌灵、30-50mg/L萘乙酸的水溶液敞口瓶中，2-3d更换一次水溶液，给予3500-4000Lux的光照，温度控制在18-25℃,7-15d萌芽，取萌发后生长3-5d的幼嫩芽体于超净工作台上进行消毒处理，去掉嫩芽的叶片，切取幼嫩茎段接种于快繁培养基上培养，培养条件为8h/d光照，光照强度2500-3000lux，温度22-26℃，15-20d后茎段腋芽快繁出芽，并于基部再生出多个芽，45d为一个继代周期；

B、接穗的壮苗培育：继代2-3个周期后，切取健壮的单个嫩芽或少量丛芽转移至壮苗培养基，培养条件为12h/d光照，光照强度3000-3500lux，温度22-26℃，25d后，芽体主茎抽长、粗壮，壮苗培养50-60d后离体材料主茎直径达到0.1-0.2cm即可作为接穗进行嫁接，此时的接穗为最佳状态；

C、砧木的准备和处理：砧木为当年穴盘播种实生苗，萌芽后移栽换盆培养，冬季平茬修剪后，于第二年春季萌芽，选取长度为4-6cm、茎直径为0.1-0.3cm健壮的嫩枝作为砧木；

D、嫁接操作：准备好离体接穗后，嫁接选择在环境气温15-35℃的上午进行，将塑胶圆筒切成0.5-1.0cm小段后经121℃灭菌20min待用，选择长度为4-6cm、茎直径为0.1-0.3cm健壮的砧木嫩枝，将嫩梢基部以上2-4cm部位的叶片沿基部切掉，延嫩梢基部向上3-4cm处切掉嫩梢顶端，快速往嫩梢基部套上塑胶圆筒，套往基部，露出已去掉叶片的光杆部位，同时打开离体接穗的组培瓶盖，刀片切取长度为1-2cm、茎干直径0.1-0.2cm的目标物种茎段，去掉基部叶片后将基部削成楔形，刀片快速地在砧木嫩梢切口中央向下横切一刀，深0.8-1.0cm，迅速将接穗插入砧木切口里，保证二者的形成层一端对齐即可，完成后，将塑胶圆筒往上拉至接穗和砧木的嫁接口处固定即可，最后取3cm×5cm自封袋倒立套住嫁接部位，并封上自封袋保湿，自封袋通过砧木嫩梢处漏0.5-1.0cm的缝隙即可；

E、嫁接后的管理：嫁接完成后，砧木盆苗常规管理，环境温度控制在15-35℃，高于35℃需遮阴降温处理，低于10℃需进设施大棚管理，每天观察砧木及接穗状态，及时抹除砧木基部萌芽，一周后，拉开自封袋口封条，2-3周后嫁接口愈合完好即可去掉自封袋。

2.按权利要求1所述的一种猕猴桃离体资源的嫁接保存方法，其特征在于所述步骤A中的培养基：

切取水培萌芽0.5-1.0cm的茎段做好外植体消毒工作后，置于芽诱导培养基上进行诱导培养，培养基为MS + 6-BA 1.0-3.0 mg/L + IBA 0.1-1.0 mg/L + 30% 蔗糖 + 0.8% 琼脂和MS+TDA1.0-3.0mg/L+NAA0.1-0.5mg/L+30%蔗糖+0.8%琼脂，pH5.5-6.0。

3.按权利要求1所述的一种猕猴桃离体资源的嫁接保存方法，其特征在于所述步骤B中的培养基：

壮苗培养基为MS + 6-BA 0.1-1.0 mg/L+ IBA 0.01-0.05 mg/L + 30% 蔗糖 + 0.8%琼脂上培养和MS+TDZ0.1-1.0mg/L+NAA0.01-0.05mg/L+30%蔗糖+0.8%琼脂，pH5.5-6.0。

4.按权利要求1所述的一种猕猴桃离体资源的嫁接保存方法，其特征在于

所述步骤E中的自封袋：

自封袋是由PO膜制成的吹骨自封袋，对400-800nm波长的光能达到75-90%的透光率。