[发明专利]大鳞副泥鳅精液超低温冷冻保存方法

权利要求书

1.大鳞副泥鳅精液超低温冷冻保存方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤一、将NaCl、KCl、CaCl₂·2H₂O、MgCl₂·6H₂O、NaHCO₃按照浓度比依次为80:50:5:2:50进行混合，配置成稀释液，置于4℃保存，备用；

步骤二、将大鳞副泥鳅精液与稀释液按照体积比为1:2～4进行混合，再加入体积分数为7.5％～12.5％的DMSO混匀，得到精液抗冻混合液，并分装于冻存管中；

步骤三、将步骤二的冻存管先在液氮面上方6cm处平衡10min，接着在液氮面上平衡5min，最后投入液氮中冷冻保存。

2.如权利要求1所述的大鳞副泥鳅精液超低温冷冻保存方法，其特征在于，还包括：

步骤四、将精液抗冻混合液从液氮中取出，于液氮口处平衡5min后，再于37℃水浴中解冻直至融化。

3.如权利要求1所述的大鳞副泥鳅精液超低温冷冻保存方法，其特征在于，步骤二中大鳞副泥鳅精液与稀释液的体积比为1:3，DMSO的体积分数为10％。

4.如权利要求1所述的大鳞副泥鳅精液超低温冷冻保存方法，其特征在于，步骤二中大鳞副泥鳅精液通过以下方式采集：使用MS-222溶液对大鳞副泥鳅雄鱼进行麻醉处理，用毛巾擦干鱼体水分，挤压腹部采集精液。

5.如权利要求1所述的大鳞副泥鳅精液超低温冷冻保存方法，其特征在于，步骤二中大鳞副泥鳅精液与稀释液混合前，将大鳞副泥鳅精液盛装于离心管中，在20℃的恒温水浴中保温10min，再加入浓度为50IU/mL的青霉素混匀，然后控制离心转速为160rpm，离心处理4min，保留下层液体，在下层液体中加入葡萄糖和甘油混匀，最后与稀释液混合，其中，每10mL下层液体中加入葡萄糖0.05g和0.5mL甘油。

6.如权利要求1所述的大鳞副泥鳅精液超低温冷冻保存方法，其特征在于，步骤四中在解冻过程中，将水浴中的冻存管固定，以300r/min的转速搅动水浴中的水。