[发明专利]一种用于猫冠状病毒基因扩增引物及基因分型方法

权利要求书

1.一种用于猫冠状病毒扩增的寡核苷酸引物，其特征在于，能够特异性识别猫冠状病毒S基因，应用该引物可鉴定病毒23531位单核苷酸多态性位点的基因型。

2.根据权利要求1所述引物，其特征在于，包括上游引物、下游引物和探针引物中的一种或几种的组合；以猫冠状病毒毒株C1Je基因组为参考基因组，上游引物的序列包括与参考基因组第23421-23444位区域序列一致的序列；下游引物的序列包括与参考基因组第23533-23555位区域反向互补的序列；探针引物的序列包括与参考基因组第23449-23472区域序列一致的序列；探针引物的5′-末端和3′-末端分别标记有5-羧基荧光素和BHQplus基团。

3.根据权利要求1或2所述引物，其特征在于，包括上游引物、下游引物和探针引物中的一种或几种的组合；上游引物的核苷酸序列包括SEQ ID NO：1所示核苷酸序列；下游引物的核苷酸序列包括SEQ ID NO：2所示核苷酸序列；探针引物包括SEQ ID NO：3核苷酸序列，探针引物的5′-末端和3′-末端分别标记有5-羧基荧光素和BHQplus基团。

4.权利要求1-3任一项所述引物在制备猫冠状病毒检测和/或基因分型试剂盒中的应用。

5.一种基于猫冠状病毒g.23531 A＞Y SNP位点的RNA阳性对照物，其特征在于，所述RNA阳性对照物包括RNA阳性对照物1、RNA阳性对照物2、RNA阳性对照物3中的一种或几种的组合；RNA阳性对照物1为23531T的核苷酸片段通过体外转录获得的核糖核酸片段，23531T的核苷酸片段的序列包括SEQ ID NO：4所示的序列；RNA阳性对照物2为23531C的核苷酸片段通过体外转录获得的核糖核酸片段，23531C的核苷酸片段的序列包括SEQ ID NO：5所示的序列；RNA阳性对照物3为23531A的核苷酸片段通过体外转录获得的核糖核酸片段，23531A的核苷酸片段的序列包括SEQ ID NO：6所示的序列。

6.根据权利要求5所述RNA阳性对照物，其特征在于，RNA阳性对照物1的序列包括SEQID NO：7所示的序列；RNA阳性对照物2的序列包括SEQ ID NO：8所示的序列；RNA阳性对照物3的序列包括SEQ ID NO：9所示的序列。

7.权利要求5或6所述RNA阳性对照物在制备猫冠状病毒检测和/或基因分型试剂盒中的应用。

8.一种猫冠状病毒检测和/或基因分型试剂盒，其特征在于，包括权利要求1-3任一项所述引物。

9.根据权利要求8所述试剂盒，其特征在于，还包括权利要求5或6所述RNA阳性对照物；优选的，还包括扩增反应缓冲液、dNTPs、DNA聚合酶、反转录酶、阴性对照标准品、待检测样品中的一种或几种。

10.一种猫冠状病毒检测和/或基因分型方法，其特征在于，包括以下步骤：利用权利要求1-3任一项所述引物采用扩增方法建立溶解曲线来明确23531位核苷酸对应的基因型。