[发明专利]一种用于测定人IL-36/IL36R/IL1RAcP通路抑制剂的生物学活性的方法

权利要求书

1.一种用于测定人IL-36/IL36R/IL1RAcP通路抑制剂的生物学活性的方法，所述方法包括：使用稳定表达IL36R、IL1RacP和NF-κB报告基因的细胞作为效应细胞，与IL-36β和人IL-36/IL36R/IL1RAcP通路抑制剂混合后孵育，根据测得的所述报告基因的信号值来测定所述人IL-36/IL36R/IL1RAcP通路抑制剂的生物学活性；其中，所述人IL-36/IL36R/IL1RAcP通路抑制剂为IL-36R单克隆抗体和/或IL1RAcP单克隆抗体，所述效应细胞为人外周血白血病T细胞Jurkat/IL36R/IL1RAcP/NF-κB-25#，其于2020年5月25日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC No. 19943，

所述方法包括：

(1)使用培养基将IL-36β稀释为50-150ng/mL，使用所述培养基将IL-36R单克隆抗体和/或IL1RAcP单克隆抗体稀释为40-50μg/mL作为起始浓度，再以1:4进行等比例稀释，然后将得到的系列稀释液分别与IL-36β的稀释液以1:1的体积比混合；

(2)使所述效应细胞在所述培养基中以4×10⁵-40×10⁵个细胞/mL的密度稀释，然后以1:1的体积比分别加入到步骤(1)得到的混合液中，混合后孵育6 h；

(3)向步骤(2)得到的混合液中加入所述报告基因的化学发光底物，根据得到的相对化学发光单位值（RLU）拟合四参数曲线来确定所述抗体的生物学活性。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述IL36R单克隆抗体选自ANB019和spesolimab中的一种或多种；所述IL1RAcP单克隆抗体选自BI-5041和MAB-16-0030中的一种或多种。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)中，使用培养基将IL-36β稀释为100ng/mL。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)中，使所述效应细胞在培养基中以20×10⁵个细胞/mL的密度稀释，然后以1:1的体积比分别加入到步骤(1)得到的混合液中。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)和步骤(2)中的培养基为1640+10%FBS。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(3)中，使用荧光素酶试剂盒检测化学发光值，根据得到的相对化学发光单位值拟合四参数曲线确定所述抗体的生物学活性。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在96孔板中进行步骤(2)中所述混合后孵育，然后在酶标仪上进行步骤(3)中的读取相对化学发光单位值。

8.人外周血白血病T细胞Jurkat/IL36R/IL1RAcP/NF-κB-25#，其于2020年5月25日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC No. 19943。

9.人外周血白血病T细胞Jurkat/IL36R/IL1RAcP/NF-κB-25#作为效应细胞在检测人IL-36/IL36R/IL1RAcP通路抑制剂的生物学活性中的应用，其中所述人IL-36/IL36R/IL1RAcP通路抑制剂为IL-36R单克隆抗体和/或IL1RAcP单克隆抗体，所述人外周血白血病T细胞Jurkat/IL36R/IL1RAcP/NF-κB-25#于2020年5月25日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC No. 19943。

10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，所述IL36R单克隆抗体选自ANB019和spesolimab中的一种或多种；所述IL1RAcP单克隆抗体选自BI-5041和MAB-16-0030中的一种或多种。