[发明专利]一种消除食品背景杂菌干扰的金黄色葡萄球菌分离方法

说明书

本发明第一方面公开了一种消除食品背景杂菌干扰的金黄色葡萄球菌分离方法，该分离方法包括增菌方法和纯化方法，增菌方法使用改良增菌肉汤，纯化方法使用改良胰蛋白酶大豆琼脂培养基；本发明第二方面还公开了一种金黄色葡萄球菌增菌方法和纯化方法在分离金黄色葡萄球菌的应用；本发明第三方面还公开了一种分离金黄色葡萄球菌的应用制备的一种金黄色葡萄球菌分离试剂盒。本发明提供的消除食品背景杂菌干扰的金黄色葡萄球菌分离方法有效地消除了杂菌的干扰，提高了食品中金黄色葡萄球菌的分离率，具有检测方法成本低、操作简单、准确度高等优点，具有广阔应用前景和经济效益。

技术领域

本发明涉及食品安全检测技术领域，尤其涉及一种消除食品背景杂菌干扰的金黄色葡萄球菌分离方法。

背景技术

金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)是一种重要的食源性致病菌，常引发食物中毒、医院和社区获得性感染，是我国食源性疾病监测的重点对象。由于金黄色葡萄球菌在自然界广泛存在，人畜共患，一般具有较强的菌膜形成能力，因此金黄色葡萄球菌被认为具有潜在耐药传播能力，多重耐药现象时有发生。近年来，伴随着细菌耐药性问题日益严峻，研究者们意识到食品中污染的多重耐药金黄色葡萄球菌可能成为耐药传播的载体。世界卫生组织也将金黄色葡萄球菌列为“高危害”监控对象，我国也逐步加强对金黄色葡萄球菌的监测工作。

目前，对食品中金黄色葡萄球菌的分离鉴定一般依据现行国家标准《食品安全国家标准食品微生物学检验金黄色葡萄球菌检验》(GB4789.10-2016)，采用7.5％氯化钠肉汤进行增菌处理，然后在Baird-Parker琼脂平板和血平板上划线分离。但前期从冷冻肉及肉制品(尤其是冷冻鸡肉)中分离金黄色葡萄球菌时发现，因存在扩散性的背景杂菌污染，选择性平板上常覆盖着一层灰色物质，使得菌落的表观形态发生改变，由此引起误判而导致大量的假阴性结果出现。同时该杂菌在血平板上也出现了溶血现象，会产生大量假阳性结果。更重要的是，由于杂菌具有扩散性，在后续的验证实验中难以将其与金黄色葡萄球菌分离开来。针对这一背景杂菌的污染问题，本发明根据金黄色葡萄球菌的生物学特性，对金黄色葡萄球菌的增菌方法和分离方法进行改进，以降低假阴性结果的出现。

因此，本领域的技术人员致力于开发一种金黄色葡萄球菌分离方法，具有检测方法成本低、操作简单、准确度高等优点，为金黄色葡萄球菌的分离提供了新的技术平台，可用于畜牧养殖业、食品加工业、基层医疗卫生单位和各疾病预防控制中心筛查和鉴定金黄色葡萄球菌，具有广阔的市场前景和较大的经济、社会效益，适于大范围推广应用。

发明内容

有鉴于现有技术的上述缺陷，本发明所要解决的技术问题是探索增菌液中氯化钠浓度、乙醇和琼脂在胰蛋白酶大豆琼脂中的添加量，以达到抑制杂菌生长和扩散的目的，大大降低金黄色葡萄球菌分离中假阴性结果出现的可能性。

为实现上述目的，本发明一方面提供了一种消除食品背景杂菌干扰的金黄色葡萄球菌分离方法，其特征在于，分离方法包括增菌方法和纯化方法，增菌方法使用改良增菌肉汤，纯化方法使用改良胰蛋白酶大豆琼脂培养基。

进一步地，改良增菌肉汤组分由蛋白胨10g，牛肉膏5g，氯化钠100g组成，改良增菌肉汤由组分用蒸馏水定容至1L，改良增菌肉汤pH为7.4±0.2。

进一步地，改良胰蛋白酶大豆琼脂培养基组分由胰蛋白胨15.0g，大豆蛋白胨5.0g，氯化钠5.0g，琼脂40.0g组成，改良胰蛋白酶大豆琼脂培养基由组分用蒸馏水定容至1L，定容后的改良胰蛋白酶大豆琼脂培养基经过消毒后加入乙醇10.0-20.0mL，改良胰蛋白酶大豆琼脂培养基pH为7.4±0.2。

优选地，消毒后的改良胰蛋白酶大豆琼脂培养基中乙醇的添加量为20.0mL。

本发明还提供了一种基于上述增菌方法，其特征在于，包括如下步骤：

1)取25.0g样品置于装有225mL改良增菌肉汤的无菌均质袋中；

2)将均质袋置于拍打式均质机2-3min；