[发明专利]一种冰浴辅助强碱净化结合GC-MS/MS测定酒精饮料中EC的方法

说明书

本发明属于分析检测技术领域，公开了一种冰浴辅助强碱净化结合GC‑MS/MS测定酒精饮料中EC的方法。将酒精饮料待测样品加入到乙腈‑乙酸乙酯混合溶剂中，再加入NaCl及在冰水浴下加入NaOH固体混合均匀，离心取上清液作为待测液；取阴性样品进行提取和净化，然后以得到基质溶液为溶剂配置不同浓度的EC基质校准溶液；将基质校准溶液和待测液采用GC‑MS/MS分别进样检测，制作基质校准曲线，采用外标法计算待测液中EC的含量。本发明基于冰浴辅助强碱净化的方法以及通过基质校准溶液克服基质干扰，具有灵敏度高、准确可靠、重现性好的优点，对于酒精饮料中EC的方法检出限可达0.1μg/L。

技术领域

本发明属于分析检测技术领域，具体涉及一种冰浴辅助强碱净化结合GC-MS/MS测定酒精饮料中EC的方法。

背景技术

氨基甲酸乙酯(EC)是一种已知的致癌物和诱变剂，已被国际癌症研究机构归类为2A类可能致癌物。目前，国内外学者已在酸奶、奶酪、豆制品、白酒、黄酒、啤酒、红酒和其他的葡萄酒等众多发酵食品和酒精饮料中检测到EC的存在。中国是酒精饮料消费大国，然而，食用过多含有EC的酒精饮料可能对人体健康产生危害。因此，开发酒类中氨基甲酸乙酯的检测方法对于酒精饮料产业的健康发展和消费者的营养健康具有非常重大的现实意义。

常用的氨基甲酸乙酯的检测方法主要有ELISA法、表面增强拉曼光谱法、气相色谱-质谱法(GC-MS)、液相色谱法、液相色谱串联质谱法。由于氨基甲酸乙酯的分子特性，GC-MS法是目前检测食品中EC含量最广泛使用的方法。然而，单级质谱对复杂基质中低含量EC的识别和定量仍存在较大困难，原因是EC的特征离子太小，容易受到其他基质的干扰。发明专利CN102445505A，一种快速测定饮料酒中氨基甲酸乙酯的方法；CN102608226A，一种快速测定曲或酒醅或发酵醪中氨基甲酸乙酯的方法，均公开了采用顶空-固相微萃取-气质联用技术(HS-SPME-GC-MS)来测定EC，其主要通过顶空-固相微萃取技术富集酒中的氨基甲酸乙酯，以达到净化提取的目的。但上述方法对顶空-固相微萃取设备及设备之间的联用要求较高，且仍存在一定的基质干扰，检测限只能达到1.19μg/L和1.16μg/L。因此，亟需开发一种基质干扰小、灵敏度高、重现性高、易于操作的酒精饮料中EC检测方法。

发明内容

针对以上现有技术存在的缺点和不足之处，本发明的目的在于提供一种冰浴辅助强碱净化结合GC-MS/MS测定酒精饮料中EC的方法。

本发明目的通过以下技术方案实现：

一种冰浴辅助强碱净化结合GC-MS/MS测定酒精饮料中EC的方法，包括如下步骤：

(1)样品前处理：将酒精饮料待测样品加入到乙腈-乙酸乙酯混合溶剂中，再加入NaCl混合均匀，所得混合体系在冰水浴下加入NaOH固体混合均匀，离心取上清液，剩余残液再次用乙腈-乙酸乙酯混合溶剂在冰水浴中重复萃取一次，合并萃取液后在室温下氮吹浓缩，再用乙腈-乙酸乙酯混合溶剂定容后离心，取上清液作为待测液；

(2)基质校准溶液的制备：选取阴性样品，按照步骤(1)的前处理条件进行提取和净化，得到基质溶液，然后以基质溶液为溶剂配置不同浓度的EC基质校准溶液；

(3)检测分析：将步骤(2)的基质校准溶液和步骤(1)的待测液采用气相色谱-串联三重四极杆质谱(GC-MS/MS)分别进样检测，制作基质校准曲线，采用外标法计算待测液中EC的含量。

进一步地，步骤(1)和(2)中所述乙腈-乙酸乙酯混合溶剂是指乙腈:乙酸乙酯体积比为9:1的混合溶剂。