[发明专利]用于辅助前列腺癌早期筛查的尿液核酸标志物和检测试剂盒

权利要求书

1.用尿液样本辅助前列腺癌筛查的核酸标志物，其特征在于：所述核酸标志物是由T2E融合基因、PCA3基因、MMP-2基因以及两种内参基因组成，所述两种内参基因分别为PSA基因和SPDEF基因；

所述核酸标志物的扩增引物如下：

用于扩增T2E融合基因的正向引物和反向引物，分别如SEQ ID No.1和SEQ ID No.2所示；

用于扩增PCA3基因的正向引物和反向引物，分别如SEQ ID No.3和SEQ ID No.4所示；

用于扩增MMP-2基因的正向引物和反向引物，分别如SEQ ID No.5和SEQ ID No.6所示；

用于扩增PSA基因的正向引物和反向引物，分别如SEQ ID No.7和SEQ ID No.8所示；

用于扩增SPDEF基因的正向引物和反向引物，分别如SEQ ID No.9和SEQ ID No.10所示；

用于扩增上述五种基因的通用引物，如SEQ ID No.11所示。

2.用于检测权利要求1所述核酸标志物的荧光探针，其特征在于：

对应于T2E融合基因、PCA3基因、MMP-2基因、PSA基因和SPDEF基因，所述荧光探针的核苷酸序列分别如SEQ ID No.12、SEQ ID No.13、SEQ ID No.14、SEQ ID No.15、SEQ IDNo.16所示。

3.含有权利要求1所述扩增引物和权利要求2所述荧光探针的多重荧光RT-PCR检测试剂或试剂盒。

4.如权利要求3所述的多重荧光RT-PCR检测试剂或试剂盒，其特征在于，所述RT-PCR检测试剂或试剂盒的工作过程为：

1）富集待测尿液的外泌体并提取外泌体核糖核酸RNA；

2）采用RT-PCR检测试剂或试剂盒对待测尿液样品中的外泌体RNA进行检测，检测程序分为先后依次进行的三个反应阶段，分别为逆转录、特异性引物扩增和接头引物扩增，三个反应阶段在一次测试中完成，使得一管RT-PCR检测试剂或试剂盒即可完成所有核酸标志物的扩增和定量检测过程。

5.如权利要求4所述的多重荧光RT-PCR检测试剂或试剂盒，其特征在于，所述RT-PCR检测试剂或试剂盒的工作过程还包括测试结果的判读诊断过程，具体为：将核酸标志物的定量检测结果的Ct值带入回归模型，计算前列腺癌风险的评估参数；对比评估参数和风险阈值，判断受试者的患有前列腺癌症的风险，以及诊断是否需要进行前列腺穿刺检查。

6.如权利要求4所述的多重荧光RT-PCR检测试剂或试剂盒，其特征在于，所述多重荧光RT-PCR检测试剂或试剂盒，为前列腺癌诊断试剂或试剂盒。