[发明专利]一种牡丹花粉在液氮中的长效保存法

说明书

本发明公开了一种牡丹花粉在液氮中的长效保存法，包括以下步骤：步骤一、花粉采集；剪取父本牡丹花朵，在室内去除花瓣和花萼后，放于干净的培养皿中，置于阴凉通风处进行自然干燥，观察花药开裂欲散粉时，轻轻抖动花头并收集花粉，待花粉自然干燥后过筛子，去除杂质；对所需要储存的花粉用TTC法进行活力测定，测定有活力的花粉可进行储存；步骤二、花粉储存：将花粉装入容器内，并放于液氮罐配置的提斗内，为防止容器在液氮罐内从提斗内飞出，本发明的牡丹花粉通过在液氮中保存，解决了花粉长时间储存而保持活力的问题；经过本发明所述的花粉储存方法，能够有效保证花粉活力，解决了远缘杂交花期不遇问题。

技术领域

本发明属于植物生命活性的保存技术领域，具体涉及一种牡丹花粉在液氮中的长效保存法。

背景技术

牡丹是集观赏、药用、茶用、油用、食用等用途于一身的经济作物，在国内外都备受关注，近年来随着牡丹产业化的发展，牡丹的品种改良和推陈出新显得越来越重要，牡丹杂交育种是培育牡丹新品种最常用、最有效的方法，在定向培育新、奇、特、优牡丹新品种的过程中，许多的优良组合，常常会碰到杂交父母本花期不遇问题，为解决这个问题，尤其是父本花期晚于母本花期较远的情况下，要想完成这个杂交，父本花粉需要保存一年之久，这样花粉的活力保持又成了难题。

发明内容

本发明为了解决上述技术问题，提供一种牡丹花粉在液氮中的长效保存法，通过液氮超低温储存花粉，有效地保存了花粉活力，拉近了杂交父母本在时间和空间上的距离，从而使杂交育种得以完成。

本发明所采用的技术方案是：一种牡丹花粉在液氮中的长效保存法，包括以下步骤：

步骤一、花粉采集；剪取父本牡丹花朵，在室内去除花瓣和花萼后，放于干净的培养皿中，置于阴凉通风处进行自然干燥，观察花药开裂欲散粉时，轻轻抖动花头并收集花粉，待花粉自然干燥后过筛子，去除杂质；对所需要储存的花粉用TTC法进行活力测定，测定有活力的花粉可进行储存；

步骤二、花粉储存：将花粉装入容器内，并放于液氮罐配置的提斗内，为防止容器在液氮罐内从提斗内飞出，还要将提斗用布包严，之后再将提斗放于液氮罐底部，液氮罐放于阴凉干燥通风处；

步骤三、液氮充足供应；为保证花粉在储存过程中液氮不间断，特准备两个液氮罐，经常观察，待装有花粉的液氮罐其液氮残余量较少时，可将另一个液氮罐加满液氮，并及时将花粉移入新的液氮罐中；

步骤四、计算花粉使用时间，在花粉使用前一星期提前设置冰柜温度的温度为最低温，取出液氮罐内装有花粉的容器放于冰柜内过渡，之后慢慢升高冰柜温度，直至冰柜温度接近自然温度，取出花粉；

步骤五、花粉活力测定：称取0.5gTTC放入烧杯中，加入少许95%的酒精使其溶解，然后用蒸馏水稀释至100ml，溶液避光保存，根据牡丹花粉吸收TTC后的颜色变化判断花粉活力，选择具有活力的牡丹花粉进行杂交，即可解决远缘杂交花期不遇的问题。

所述步骤一中，所剪取的父本牡丹花朵是处于牡丹初花期、且花尚未开时的花朵。

所述步骤一中，筛子的筛孔尺寸在40-60目，这样设置是为了便于花药、花丝和花粉分离，顺利筛出花粉，去除杂质。

所述步骤二中，装花粉的容器为带盖的一次性塑料离心管，这样可以保证安全、防止变形及花粉溢出。

所述步骤三中，当灌体重量减少到起始总重量（也即装满液氮和提斗及花粉后）的20%以下时，可将另一个液氮罐加满液氮进行替换。

所述步骤四中，设置在冰柜内的最低温度为-20℃。

其中，步骤一将装有花粉的培养皿置于阴凉处通风干燥的目的是为了避免花粉受潮发霉，有利于保存花粉活力。

其中，步骤二将液氮罐放于阴凉干燥通风处是为了延缓罐内的氮气挥发，从而使罐内的氮气被充分利用，利用率高。