[发明专利]一种用于检测土栖腐霉菌的LAMP引物组合物、试剂盒及其检测方法

权利要求书

1.一种用于检测土栖腐霉菌的LAMP引物组合物，该引物组合物包含：如SEQ ID NO.1所示的正向内引物FIP，如SEQ ID NO.2所示的反向内引物BIP，如SEQ ID NO.3所示的正向外引物F3，如SEQ ID NO.4所示的反向外引物B3，如SEQ ID NO.5所示的正向环引物LF， 以及如SEQ ID NO.6所示的反向环引物LB。

2.权利要求1所述的LAMP引物组合物在检测土栖腐霉菌中的应用。

3.权利要求1所述的LAMP引物组合物在制备检测土栖腐霉菌的试剂中的应用。

4.一种检测土栖腐霉菌的LAMP试剂盒，其特征在于所述的试剂盒中各试剂浓度为：0.8μM正向内引物FIP、0.8 μM反向内引物BIP、0.1 μM正向外引物F3、0.1 μM反向外引物B3、0.1μM正向环引物LF、0.1 μM反向环引物LB、0.8 M 甜菜碱、1.4 mMdNTPs、20 mMTris-HCl、10mMKCl、10 mM (NH₄)₂SO₄、6 mM MgSO₄、0.1% Triton X-100、Bst DNA polymerase 8U/μl，使用超纯水配制成1 mL检测溶液； 其中正向内引物FIP如SEQ ID NO.1所示，反向内引物BIP如SEQ ID NO.2所示，正向外引物F3如SEQ ID NO.3所示，反向外引物B3如SEQ ID NO.4所示，正向环引物LF如SEQ ID NO.5所示， 反向环引物LB如SEQ ID NO.6所示。

5.权利要求4所述的检测土栖腐霉菌的LAMP试剂盒在检测土栖腐霉菌中的应用。

6.一种土栖腐霉菌的LAMP检测方法，其特征在于利用权利要求4所述的LAMP试剂盒进行LAMP反应，然后在扩增产物中加入SYBR Green I，观察反应溶液的颜色变化， 如果颜色由橙色变为黄绿色，或在紫外灯下有荧光，表示待检物中存在土栖腐霉菌，如果颜色没有变化仍是橙色，或在紫外灯下无荧光，则表示待检物中不存在土栖腐霉菌。

7.根据权利要求6所述的LAMP检测方法，其特征在于包括提取待检微生物的DNA，取4 μL DNA溶液作为反应模板，加入21 μL LAMP试剂盒中的检测溶液进行LAMP，LAMP反应程序为：62℃反应扩增70 min，然后在扩增产物中加入0.25 μL SYBR Green I ，观察反应溶液的颜色变化，如果颜色由橙色变为黄绿色，或在紫外灯下有荧光，表示待检物中存在土栖腐霉菌，如果颜色没有变化仍是橙色，或在紫外灯下无荧光，则表示待检物中不存在土栖腐霉菌。