[发明专利]一种基因组编辑工具及其应用有效
| 申请号： | 202010604454.5 | 申请日： | 2020-06-29 |
| 公开（公告）号： | CN111718954B | 公开（公告）日： | 2021-12-31 |
| 发明（设计）人： | 吴丹丹;纪春;张晶;郑凯丽;许敏敏;陈彩霞 | 申请（专利权）人： | 合肥戬谷生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/82 | 分类号： | C12N15/82;C12N15/29;A01H5/00;A01H6/46 |
| 代理公司： | 北京金智普华知识产权代理有限公司 11401 | 代理人： | 尹小燕 |
| 地址： | 230000 安徽省合肥*** | 国省代码： | 安徽;34 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 基因组 编辑 工具 及其 应用 | ||
1.一种基因组编辑工具在植物基因组编辑中的应用，所述基因组编辑工具包含如SEQID No.1所示的核苷酸序列；所述核苷酸序列由广适Sc++基因在序列优化基础上进一步突变R221K/N404K两个关键功能位点进化而来。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：包括制备包含所述基因组编辑工具的表达载体、表达盒、打靶载体或转基因细胞中的至少一种。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于：载体包括PUC57-AMP或pHUN400。
4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述植物包括单子叶植物。
5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于：所述单子叶植物包括水稻。
6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于：所述水稻包括粳稻。
7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于：所述粳稻为粳稻日本晴。
8.一种植物基因组编辑方法，其特征在于，包括：
将包含如SEQ ID No.1所示的核苷酸序列的片段与载体连接，获取包含编辑工具的植物表达载体；
将向导RNA的表达框与包含编辑工具的植物表达载体连接，获取包含sgRNA表达框的植物表达载体；
选择包括NNG特征的PAM序列的靶位点序列，其中，N为A,T,G或C；
根据靶位点合成正、反向寡核苷酸链，退火形成具有粘性末端的双链DNA，作为构建重组载体的插入片段；
将插入片段与包含sgRNA表达框的植物表达载体连接，获得重组载体，并提取重组载体质粒；
将重组载体质粒转入植物细胞，对植物基因组进行编辑。
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