[发明专利]一种核桃雄花抗氧化剂及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种核桃雄花提取物的制备方法，其特征是，包括以下步骤：

（1）将核桃雄花序切碎或粉碎；

（2）将切碎或粉碎的核桃雄花序采用高压脉冲电场技术进行细胞破碎和灭酶处理，处理介质为柠檬酸水溶液，或抗坏血酸水溶液，或柠檬酸和抗坏血酸的混合水溶液；

高压脉冲电场技术参数为：脉冲发生器波形为方波，电场强度为35~60kV/cm，脉冲宽度5~10μs，脉冲频率350~500Hz，作用时间为15~25s；

柠檬酸水溶液或抗坏血酸水溶液的质量浓度为0.2~0.4%；柠檬酸和抗坏血酸的混合水溶液中，柠檬酸的质量分数为0.05~0.25%，抗坏血酸的质量分数为0.05~0.25%；

（3）高压脉冲电场处理结束后，搅拌条件下维持5~10min，分离，得到上清液一和沉淀一；

（4）将步骤（3）得到的沉淀一采用乙酸乙酯进行浸提，回收乙酸乙酯，得到乙酸乙酯浸提物和沉淀二；

沉淀一和乙酸乙酯的质量比例为1:1~5；

（5）将沉淀二采用碱溶酸沉的方法提取蛋白质；

沉淀二与氢氧化钠溶液的质量比例为1:5~10，氢氧化钠溶液的质量浓度为0.05~0.1moL/L；碱溶后，进行离心分离，得到上清液和沉淀，将沉淀再采用上述方法进行碱溶，合并上清液，用酸调节上清液的pH至4.5，蛋白沉淀析出；

（6）采用复合酶进行酶解，酶解后分离，得到上清液二，膜过滤，收集透过液；

所述复合酶为木瓜蛋白酶和胰蛋白酶的混合物，木瓜蛋白酶和胰蛋白酶的酶活力单位比值为1:1~2，酶解pH为7~8；

（7）合并上清液一、乙酸乙酯浸提物和透过液，混合均匀，浓缩、干燥后制备得到核桃雄花提取物。

2.如权利要求1所述的方法，其特征是，步骤（1）中，切碎或粉碎后的核桃雄花序小于1毫米。

3.如权利要求1所述的方法，其特征是，步骤（3）中，搅拌条件为磁力搅拌，转速为500~2000rpm。

4.如权利要求1所述的方法，其特征是，步骤（4）中，浸提温度为常温，在搅拌条件下浸提，浸提时间为10~30min，采用磁力搅拌，搅拌转速为500~800rpm。

5.如权利要求1所述的方法，其特征是，步骤（5）中，碱溶温度为常温，在搅拌条件下碱溶，碱溶时间为10~30min，采用磁力搅拌，搅拌转速为500~800rpm。

6.如权利要求1所述的方法，其特征是，步骤（6）中，酶解温度为常温，加酶量为蛋白质沉淀质量0.1~0.5%，每克复合酶的酶活力为30万U~50万U，在搅拌条件下的酶解时间为0.5~1h，采用磁力搅拌，搅拌转速为200~800rpm。

7.如权利要求1所述的方法，其特征是，步骤（6）中，膜的孔径为1000~5000道尔顿。

8.权利要求1~7中任一项所述的方法制备得到的核桃雄花提取物。

9.权利要求8所述的核桃雄花提取物在制备抗氧化剂中的应用。