[发明专利]一种核桃雄花抗氧化剂及其制备方法和应用

说明书

本发明涉及一种核桃雄花抗氧化剂及其制备方法和应用，该方法包括：将制碎的核桃雄花序采用高压脉冲电场技术进行细胞破碎和灭酶处理；高压脉冲电场处理结束后，搅拌条件下维持5～10min，分离，得到上清液一和沉淀一；将沉淀一采用乙酸乙酯进行浸提，回收乙酸乙酯，得到乙酸乙酯浸提物和沉淀二；将沉淀二采用碱溶酸沉的方法提取蛋白质；采用复合酶进行酶解，酶解后分离，得到上清液二，膜过滤，收集透过液；合并上清液一、乙酸乙酯浸提物和透过液，混合均匀，浓缩后制备得到核桃雄花抗氧化剂。本发明制备的抗氧化剂抗氧化活性高、提取率高。

技术领域

本发明涉及一种核桃雄花抗氧化剂及其制备方法和应用。

背景技术

公开该背景技术部分的信息仅仅旨在增加对本发明的总体背景的一些理解，而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。

抗氧化剂根据其来源分为人工合成抗氧化剂和天然抗氧化剂。人工合成抗氧化剂由于其潜在的毒性和致癌性等逐渐受到人们的排斥，因此，从植物中寻找天然、高效、低毒的抗氧化剂成为目前抗氧化剂发展的一个必然趋势。从目前的研究报道来看，天然植物抗氧化剂绝大部分都是多酚类物质，其中应用比较多的有茶多酚、迷迭香提取物、葡萄籽提取物等。

核桃是我国栽培历史悠久而广泛的重要干果树种之一，目前针对核桃树主要采收核桃坚果，为了尽可能地提高核桃产量，在核桃栽培过程中需要疏掉大量雄花，以供给果实营养。近年来国内核桃栽培面积以每年10％的速度递增，一株18年生核桃树每株有雄花序2000多个，干重5kg多，可见，核桃雄花序年产稳定，具有极大的开发利用价值。

汪海波等采用DPPH·清除法研究新鲜核桃雄花序的抗氧化活性，主要方法包括：采用乙醇作为提取剂，提取5次，得到乙醇提取物，然后再采用石油醚、乙酸乙酯或正丁醇等体积萃取4次，得到的乙酸乙酯提取物虽然对DPPH·清除作用，但是存在提取效率低、有机溶剂使用量大等缺点。王长蕾等人在对核桃雄花中的总酚类物质进行浸提时，采用甲醇作为提取剂、常规水浴浸提或超声波辅助浸提，虽然超声波辅助浸提法具有用时短、总多酚提取量高的优点，但是，试验中采用高温浸提，加之超声波处理，加剧了多酚的氧化，使得其作为抗氧化剂时清除自由基的活性降低。

发明内容

针对以上背景技术，首先，本发明人采用了以甲醇作为提取剂、超声波辅助浸提法进行试验，然而得到的醇提物并没有获得理想的抗氧化活性效果。

其次，经过本发明人的研究，发现，在常温下，核桃雄花序中的过氧化物酶和多酚氧化酶活性较高，多酚类等物质比较容易被多酚氧化酶等酶氧化失活。

此外，核桃雄花中的蛋白质含量较高，针对现有技术中核桃花抗氧化成分提取效率低的问题，本发明人研究了核桃花多肽的抗氧化活性，发现，经过一定方法制备得到的核桃花多肽具有较强的抗氧化活性。

针对以上问题，本发明公开了一种核桃雄花抗氧化剂的制备方法，具体的，本发明采用以下技术方案：

在本发明的第一个方面，提供一种核桃雄花提取物的制备方法，包括以下步骤：

(1)将核桃雄花序切碎或粉碎；

(2)将制碎的核桃雄花序采用高压脉冲电场技术进行细胞破碎和灭酶处理，处理介质为柠檬酸水溶液或抗坏血酸水溶液或柠檬酸和抗坏血酸的混合水溶液；

(3)高压脉冲电场处理结束后，搅拌条件下维持5～10min，分离，得到上清液一和沉淀一；

(4)将步骤(3)得到的沉淀一采用乙酸乙酯进行浸提，回收乙酸乙酯，得到乙酸乙酯浸提物和沉淀二；

(5)将沉淀二采用碱溶酸沉的方法提取蛋白质；

(6)采用复合酶进行酶解，酶解后分离，得到上清液二，膜过滤，收集透过液；