[发明专利]一种提高CD90posi细胞分离效率的方法

权利要求书

1.一种提高CD90posi细胞分离效率的方法，其特征在于，包括如下步骤：

S1、取消毒的碟子，向其中加入含1.2～1.5％双抗的PBS溶液，备用；

S2、将获得的小块肝癌组织先用PBS漂洗，去除组织表面的血污，剪去附带的其他组织脂肪、多余的纤维，切成小块，放在步骤S1备好的碟子内，用手术刀切成1～2mm³的组织碎块，得处理好的碎组织块；

S3、向步骤S2制得的处理好的碎组织块中加入细胞促进剂，混合均匀，得含细胞促进剂与PBS溶液的碎组织块；

S4、将步骤S3所得含细胞促进剂与含1.2～1.5％双抗的PBS溶液的碎组织块置于组织研磨匀浆器中，用手缓慢研磨6～8次，制得散在细胞的匀浆；

S5、将步骤S4制得的散在细胞的匀浆过60～80目筛，然后将细胞匀浆悬液静置5～10min，弃去沉淀，取上部细胞悬液，用PBS溶液洗涤3～5次，然后加入含0.6～0.8％双抗的PBS溶液，离心，收集细胞，即得；步骤S1、S4、S5所述的双抗由青霉素与氯霉素按质量比1：1组成；步骤S3中所述细胞促进剂的添加量为0.3～0.5g，由γ-球蛋白与维生素B2按质量比9～11：2～5组成。

2.如权利要求1所述提高CD90posi细胞分离效率的方法，其特征在于，步骤S1所用的碟子为直径3～6cm的圆形。

3.如权利要求1所述提高CD90posi细胞分离效率的方法，其特征在于，步骤S1、S3、S4及S5所述的PBS溶液由磷酸氢二钠1.9734g与磷酸二氢钾0.2245g，加水使溶解成1000ml，调节pH值至7.3制得。

4.如权利要求1所述提高CD90posi细胞分离效率的方法，其特征在于，步骤S2中将组织切成6～8mm³的小块。

5.如权利要求1所述提高CD90posi细胞分离效率的方法，其特征在于，步骤S3中所述细胞促进剂添加量为0.4g，由γ-球蛋白与维生素B2按质量比10：3组成。

6.如权利要求1所述提高CD90posi细胞分离效率的方法，其特征在于，步骤S5所述的离心条件为于2000～3000rpm的转速下，搅拌10～20min。