[发明专利]一种提高CD90posi细胞分离效率的方法

说明书

本发明属于细胞工程技术领域，具体涉及一种提高CD90posi细胞分离效率的方法。本发明是从肝癌组织中直接提取CD90posi细胞，提取时，加入细胞促进剂，有效促进CD90posi细胞的聚集，提高了细胞分离效率，有利于后续研究，而且，本发明提供的分离方法，操作过程极其简单，有效降低了分离成本，有助于对CD90posi细胞的后续研究。

技术领域

本发明属于细胞工程技术领域，具体涉及一种提高CD90posi细胞分离效率的方法。

背景技术

原发性肝癌是我国最常见的恶性肿瘤之一，其发病率高、死亡率高，病死率位居国内肿瘤第二位，严重威胁人民群众的生命健康。肝癌起病隐匿，临床表现缺乏特别性，就医时往往处于肝癌中晚期，肝癌早期患者难以发现，严重影响肝癌的治疗效果。

现有文献指出，原发性肝癌的临床病象极不典型，其症状一般多不明显，特别是在病程早期。通常5cm以下小肝癌约70％左右无症状，无症状的亚临床肝癌亦70％左右为小肝癌。症状一旦出现，说明肿瘤已经较大，其病势的进展则一般多很迅速，通常在数周内即呈现恶病质，往往在几个月至1年内即衰竭死亡。临床病象主要是两个方面的病变：①肝硬化的表现，如腹水、侧支循环的发生，呕血及肢体的水肿等；②肿瘤本身所产生的症状，如体重减轻、周身乏力、肝区疼痛及肝脏肿大等。

因此，如何对肝癌相关细胞进行深入研究，以获得肝癌最佳治疗手段，避免因延误治疗导致的危害，是目前所有人最关心的一个问题。

本发明在研究过程中，发现了CD90posi细胞与肝癌的发生显著相关，可以用于检测肝癌，但是，如何更好、更多的获得CD90posi细胞用于后续研究是一个难点。

现有的细胞分离方法主要包括组织块法、酶解组织法及酶消化法等，这些方法虽然可以分离出细胞，但分离出的细胞多掺杂其他组织细胞，导致细胞纯度低，分离效率低，造成大量的细胞浪费。

发明内容

针对现有技术普遍存在的缺陷，本发明提供了一种提高CD90posi细胞分离效率的方法。本发明提供的分离方法，直接从肝癌组织中分离CD90posi细胞，分离效率高，且制备过程简单，有利于对CD90posi细胞的后续研究。

为了达到上述目的，本发明采用的技术方案为：

一种提高CD90posi细胞分离效率的方法，包括如下步骤：

S1、取消毒的碟子，向其中加入含1.2～1.5％双抗的PBS溶液，备用；

S2、将获得的小块组织先用PBS漂洗，去除组织表面的血污，剪去附带的其他组织，如脂肪、多余的纤维，切成小块，放在步骤S1备好的碟子内，用手术刀切成1～2mm³的组织碎块，得处理好的碎组织块；

S3、向步骤S2制得的处理好的碎组织块中加入细胞促进剂，混合均匀，得含细胞促进剂与PBS溶液的碎组织块；

S4、将步骤S3所得含细胞促进剂与含1.2～1.5％双抗的PBS溶液的碎组织块置于组织研磨匀浆器中，用手缓慢研磨6～8次，制得散在细胞的匀浆；

S5、将步骤S4制得的散在细胞的匀浆过60～80目筛，然后将细胞匀浆悬液静置5～10min，弃去沉淀，取上部细胞悬液，用PBS溶液洗涤3～5次，然后加入含0.6～0.8％双抗的PBS溶液，离心，收集细胞，即得。

优选地，步骤S1所用的碟子为直径3～6cm的圆形。

优选地，步骤S1、S3、S4及S5所述的PBS溶液由磷酸氢二钠1.9734g与磷酸二氢钾0.2245g，加水使溶解成1000ml，调节pH值至7.3制得。

优选地，步骤S1、S4、S5所述的双抗由青霉素与氯霉素按质量比1：1组成。