[发明专利]一种红椎幼胚离体再生的方法

权利要求书

1.一种红椎幼胚离体再生的方法，其特征在于包括以下步骤：

(1)外植体采集：采集红椎单株上的未成熟幼果作为外植体；

(2)愈伤组织培养：对外植体消毒后剥开外种皮取出未成熟胚，未成熟胚诱导培养形成愈伤组织；

(3)不定芽培养：对愈伤组织进行不定芽培养，得不定芽；

(4)壮苗培养：对不定芽进行壮苗培养，得幼苗；

(5)生根培养：对幼苗进行生根培养，得试管苗；

(6)移植：将试管苗进行移植，得种苗。

2.根据权利要求1所述的红椎幼胚离体再生的方法，其特征在于：所述步骤(2)中：使用酒精消毒后再使用升汞溶液消毒并冲洗；然后剥开外种皮取出未成熟胚，未成熟胚接种到愈伤组织培养基上培养40-55天形成愈伤组织。

3.根据权利要求2所述的红椎幼胚离体再生的方法，其特征在于：所述愈伤组织培养基的条件为：

改良White培养基，1.0-3.0mg/L核黄素，1.0-5.0mg/L抗坏血酸，0.8-0.8mg/L 6-BA，0.1-0.5mg/L NAA，25-30g/L蔗糖，3.0-4.0g/L琼脂，pH为5.4-5.8。

4.根据权利要求1所述的红椎幼胚离体再生的方法，其特征在于：所述步骤(3)中，将愈伤组织接种到不定芽培养基培养30-45天；

所述不定芽培养基的条件为：

1/2MS培养基，1.0-3.0mg/L核黄素，1.0-5.0mg/L抗坏血酸，0.8-1.5mg/L 6-BA，1.0-1.5mg/LNAA，25-30g/L蔗糖，3.0-4.0g/L琼脂，pH为5.4-5.8。

5.根据权利要求1所述的红椎幼胚离体再生的方法，其特征在于：所述步骤(4)中，将不定芽切成1.5-2cm长的茎段并接种到壮苗培养基中培养20-30天；

所述壮苗培养基的条件为：

MS培养基，0.5-1.0mg/L 6-BA，0.1-0.5mg/L NAA,30-45g/L蔗糖，3.0-4.0g/L琼脂，100-200g/L椰子汁，pH为5.4-5.8。

6.根据权利要求1所述的红椎幼胚离体再生的方法，其特征在于：所述步骤(5)中，将幼苗接种到生根培养基中培养20-30天；

所述生根培养基的条件为：

White培养基，0.5-1.0mg/L NAA，25-35g/L蔗糖，3.0-4.0g/L琼脂，pH为5.4-5.8。

7.根据权利要求1所述的红椎幼胚离体再生的方法，其特征在于：所述步骤(6)中：将试管苗转移至大棚内炼苗，然后将试管苗的根部洗净后移植于基质中栽培成红椎种苗。

8.根据权利要求7所述的红椎幼胚离体再生的方法，其特征在于：所述基质中包含黄心土、沤制树皮和炭化树皮。

9.根据权利要求1-8任一所述的红椎幼胚离体再生的方法，其特征在于：在步骤(2)和步骤(3)中，培养条件为：恒温25℃，避光。

10.根据权利要求9所述的红椎幼胚离体再生的方法，其特征在于：在步骤(4)和步骤(5)中，培养条件为：温度25-28℃，光照强度为2500-3000lx，光照时间为12-14小时/天，湿度为60-70％。