[发明专利]一种红椎幼胚离体再生的方法

说明书

本发明公开了一种红椎幼胚离体再生的方法，属于植物组织培养领域。包括步骤：采集红椎单株上的未成熟幼果作为外植体；取出外植体的未成熟胚诱导培养形成愈伤组织；不定芽培养；壮苗培养；生根培养；进行移植。本发明采用植物组织培养技术建立了红椎幼胚离体再生的方法，其愈伤组织诱导率达80％以上，不定芽诱导率达到了83％以上，生根率达85％以上，移植成活率达到了90％以上。本发明具有成本低廉、繁殖系数高、种苗生长相对一致等特点，可直接用于红椎种苗的工厂化生产，对于促进红椎的种质资源利用具有重大意义。

技术领域

本发明涉及植物组织培养技术领域，具体涉及一种红椎幼胚离体再生的方法。

背景技术

红椎(Castanopsis hystrix Miq.)是壳斗科栲属的常绿阔叶乔木，别名红拷、红柯，常绿大乔，具有生长快、干形通直、落叶丰富、改土效果好等优良特性。当年生枝与叶柄及花序轴均呈紫褐色，叶纸质或薄革质，是我国特有种，主要分布于福建东南部、湖南西南部、广东、广西、海南等地；是我国华南地区重要的乡土阔叶珍贵用材和高效多用途树种。其材质坚硬、耐腐烛性强、不开裂、不变形、易加工，可供广泛使用；种子富含淀粉，可作为食物和酿酒原材料；种实、壳斗均富含单宁，可提制栲胶。萌芽更新能力强，萌芽条生长迅速，砍伐后易自然更新；枯枝落叶丰富，对土壤要求不高，可以作为用材林和水源涵养林树种进行种植，也可以作为林分改造的混交造林树种。

目前，红椎主要以种子园和母树林的有性繁殖为主。然而，有性繁殖存在着分化的问题，不能最大限度地提高遗传改良增益，而无性繁殖却能克服有性繁殖的上述不足。目前，国内外尚未有红椎组织培养技术的报道。

发明内容

本发明针对上述现有技术存在的问题，提供一种红椎幼胚离体再生的方法，建立红椎离体快速繁殖技术体系

为实现本发明目的，通过以下技术方案予以实现：

一种红椎幼胚离体再生的方法，包括以下步骤：

(1)外植体采集：采集红椎单株上的未成熟幼果作为外植体；

(2)愈伤组织培养：对外植体消毒后剥开外种皮取出未成熟胚，未成熟胚诱导培养形成愈伤组织；

(3)不定芽培养：对愈伤组织进行不定芽培养，得不定芽；

(4)壮苗培养：对不定芽进行壮苗培养，得幼苗；

(5)生根培养：对幼苗进行生根培养，得试管苗；

(6)移植：将试管苗进行移植，得种苗。

优选地，所述步骤(2)中：使用酒精消毒后再使用升汞溶液消毒并冲洗；然后剥开外种皮取出未成熟胚，未成熟胚接种到愈伤组织培养基上培养40-55天形成愈伤组织。

进一步优选地，所述愈伤组织培养基的条件为：

改良White培养基，1.0-3.0mg/L核黄素，1.0-5.0mg/L抗坏血酸，0.8-0.8mg/L 6-BA，0.1-0.5mg/L NAA，25-30g/L蔗糖，3.0-4.0g/L琼脂，pH为5.4-5.8。

优选地，所述步骤(3)中，将愈伤组织接种到不定芽培养基培养30-45天；

所述不定芽培养基的条件为：

1/2MS培养基，1.0-3.0mg/L核黄素，1.0-5.0mg/L抗坏血酸，0.8-1.5mg/L 6-BA，1.0-1.5mg/LNAA，25-30g/L蔗糖，3.0-4.0g/L琼脂，pH为5.4-5.8。

优选地，所述步骤(4)中，将不定芽切成1.5-2cm长的茎段并接种到壮苗培养基中培养20-30天；

所述壮苗培养基的条件为：