[发明专利]一种用于治疗白菜软腐病的药物的筛选方法

权利要求书

1.一种用于治疗白菜软腐病的药物的筛选方法，其特征 在于，包括如下步骤：

1)质粒构建：将胡萝卜软腐果胶杆菌胡萝卜亚种PC1菌株的N琥珀酰二氨基庚二酸脱琥珀酰酶的如Seq ID No.1所示的核苷酸序列插入到带有T7启动子的大肠杆菌原核表达载体pET28a的Nde1和Xho1酶切位点之间，得到pET28a-PccdapE质粒；

2)PccDapE蛋白诱导表达：将pET28a-PccdapE质粒转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中，LB培养基37℃培养至OD₆₀₀在0.6～0.8之间；加入IPTG至浓度为0.1mM，12℃，200rpm条件下，诱导培养48h；

3)使用镍离子螯合树脂柱分离纯化PccDapE蛋白；

4)向PccDapE蛋白溶液中添加待选化合物进行荧光淬灭反应；

5)选择可与PccDapE蛋白发生荧光淬灭反应的化合物配制成梯度浓度的化合物溶液，与大白菜软腐病菌菌液混合，28℃，150rpm摇床培养24h，通过分光光度计确定化合物的最佳抑菌浓度。

2.如权利要求1所述的筛选方法，其特征在于，所述步骤4)中荧光淬灭反应的荧光激发波长为280nm；激发和发射狭缝均为5nm，在荧光光度计上记录290～500nm波长范围内的发射光谱。