[发明专利]人体液中PNS或AE自身抗体检测试剂盒及检测方法

说明书

本发明公开了人体液中PNS或AE自身抗体检测试剂盒及检测方法，检测试剂盒包括试纸条、工作液、封闭蛋白液、二抗和显色剂；检测方法包括将工作液、封闭蛋白液混合形成样品稀释液，在样品稀释液中加入待检测样品；将待检测样品滴加到试纸条的样品垫上；取下试纸条上的吸水垫和样品垫，对载体膜进行洗涤，洗涤结束后再将吸水垫和样品垫固定在载体膜的两端；试纸条的样品垫端浸入二抗稀释液中，室温下静置5～10min；将载体膜再次进行洗涤；将试纸条的样品垫端浸入显色剂中，观察显色情况。本发明在检测过程中样品层析方法为倒层析法，同时载体膜洗涤方法为超声洗涤，有效的增加的检测灵敏度和特异性。强阳性血清稀释万倍以上仍可检测出抗体。

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，具体涉及一种人体液中PNS或AE自身抗体检测试剂盒及检测方法。

背景技术

神经系统副肿瘤综合症(Paraneoplastic neurological Syndromes，PNS)指与癌症有关，在肿瘤尚未转移时，就对远隔自身器官造成影响，导致器官功能障碍的疾病。PNS的发病原因是肿瘤细胞对神经元表面蛋白产生免疫应答。虽然PNS在癌症患者中的发病率仅有1％，但是其具有重要的临床意义，PNS的发病时期通常处于癌症早期或局限期，因此PNS有助于发现潜在的恶性原发性肿瘤。根据Graus等人在2004年发表的PNS诊断标准，PNS病人的血清或者脑脊液中通常能检测到神经元自身免疫抗体。目前发现的PNS相关自身抗体已有近20种。

自身免疫性脑炎(Autoimmune encephalitis，AE)指一类有自身免疫机制导致的脑炎，其临床表现为边缘性脑炎，内在机制为人体内免疫系统对神经元细胞内蛋白、突触受体、离子通道和神经元表面蛋白的产生了自身抗体。Divyanshu Dubey等人2018年发表的文献中描述了自身免疫性脑炎的诊断的最新诊断标准，常规的医学影像学手段可初步确定AE，由于AE是一组异质性疾病，需要通过根据不同的自身抗体对病人进行同质化分组。由此可见，自身抗体的鉴别对于AE的诊断治疗具有极其重要的意义。

目前针对PNS和AE疑似患者血液和脑脊液中自身抗体检测的方法主要有间接免疫荧光法、流式细胞术、酶联免疫吸附法、蛋白质免疫印迹法、免疫斑点法，其中间接免疫荧光法与蛋白质免疫印迹法均均有操作复杂，操作技巧强(需专业人士或有经验人士操作)，且检测时长较长(需两天)；酶联免疫吸附法与流式细胞术检测成本高，同时需要特殊设备及需要有经验人士操作；免疫斑点法虽然提高了检测灵敏度，但是检测周期也需要1h。另外，使用这些方法在临床检测上的累积灵敏度估计为60％～80％，而且均存在操作繁琐，检测成本高，抗体需求量大，检测过程耗时等不足。

发明内容

针对现有技术存在的问题，本发明的目的是提供一种人体液中PNS或AE自身抗体检测试剂盒及检测方法，解决现有的检测方法或检测试剂盒检测成本高、抗体需求量大、检测灵敏度低、检测过程耗时等问题。

为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案予以实现：

人体液中PNS或AE自身抗体检测试剂盒，包括试纸条、样品稀释液、二抗、洗涤液和显色剂；

所述的试纸条包括垫板、设置有对照点和检测点的载体膜、吸水垫和样品垫；所述的载体膜检测点上固化有靶抗原Ag，Ag表示PNS或AE疾病自身抗体对应的靶抗原中的某一抗原；对照点上固化有阴性对照抗原；所述的吸水垫、载体膜和样品垫均铺设在垫板上，吸水垫设置在载体膜对照点端，样品垫设置在载体膜检测点端；

所述的工作液为1×PBS或1×TBS或100mM磷酸钠盐缓冲液、0.5％～1％Triton X-100或0.5％～1％Tween-20、0.02％～0.05％EDTA的混合液，工作液的pH＝6.8～7.2；

所述的封闭蛋白液通过以下方法制备得到：